Associação do fitoterápico Vitex agnus-castus e do meio condicionado de macrófagos polarizados em M1 em modelos in vivo e in vitro para estudo do metabolismo ósseo de ratas ovariectomizadas - Suguimoto, Sayuri Poli (2025)
A polarização de macrófagos em fenótipos M1 e M2 influencia diretamente a osteogênese e o metabolismo ósseo, sendo relevante em condições como a osteoporose. Substâncias naturais com propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias, como o extrato de Vitex agnus-castus (VAC), despontam como alternativas promissoras aos tratamentos convencionais, especialmente em mulheres durante e após a menopausa. Este estudo avaliou o reparo ósseo da calvária e a atividade osteoblástica de células mesenquimais osteoblásticas da medula óssea femoral na presença de meio condicionado de macrófagos M1 (MC) associado ao extrato de Vitex agnus-castus em ratas ovariectomizadas. Ratas Wistar Hannover foram submetidas à ovariectomia e criação de defeitos ósseos de 5 mm na calvária, recebendo 200 mg/kg de Vitex agnus-castus por gavagem a cada dois dias e aplicação local semanal de 50 µl MC por 60 dias. As ratas foram divididas nos grupos: SHAM, SHAMMC, OVX, OVXMC, OVXVAC e OVXVAC/MC. As calvárias e fêmures foram coletados para análise histológica (HE, Tricrômico de Masson e Picrosirius Red) para avaliação qualitativa e quantitativa de trabeculado, osso neoformado, osteócitos e adipócitos. Células mesenquimais da medula óssea femoral foram cultivadas com meio osteogênico e divididas nos grupos: SHAM, SHAMMC, SHAMVAC, SHAMVAC/MC, OVX, OVXMC, OVXVAC e OVXVAC/MC. Os parâmetros avaliados foram morfologia e adesão celular, viabilidade, detecção in situ de ALP e formação de matriz mineralizada. Os dados foram submetidos à análise estatística com significância de p<0,05. In vitro, nas culturas derivadas de animais SHAM, a administração de MC aumentou a viabilidade celular nos períodos iniciais, enquanto VAC reduziu a viabilidade a partir do 7º dia. A associação de MC e VAC também resultou em redução da viabilidade celular após sete dias. A detecção de ALP foi diminuída com MC e com a associação VAC/MC, enquanto a mineralização não foi afetada pela administração isolada de MC ou VAC, mas foi reduzida pela associação em culturas mais longas. A morfologia celular foi preservada em todos os grupos, com maior espraiamento celular observado na presença de VAC. Nas culturas do grupo OVX, MC aumentou a viabilidade e a mineralização em períodos mais tardios, enquanto VAC aumentou a mineralização apenas em cultura de 14 dias. A associação VAC/MC aumentou a viabilidade a partir do 10º dia, mas não influenciou a mineralização. A expressão de ALP foi favorecida por MC e, de forma mais limitada, por VAC. No modelo in vivo, a ovariectomia promoveu alterações compatíveis com osteoporose, como aumento do peso corporal, redução do número de osteócitos, da porcentagem de osso trabecular e aumento de adipócitos na epífise femoral. VAC não interferiu no trabeculado ósseo do grupo SHAM nem favoreceu sua manutenção em OVX, mas promoveu a preservação da organização das fibras colágenas nessas regiões. Na calvária, a ovariectomia reduziu a neoformação óssea sem afetar o número de osteócitos. A administração de MC e VAC, isoladas ou associadas, aumentou significativamente o número de osteócitos e a neoformação óssea em OVX. VAC também favoreceu a organização das fibras colágenas na região de osso neoformado. Os resultados sugerem efeitos distintos e fase-dependentes de MC e VAC sobre a viabilidade, diferenciação e mineralização de células mesenquimais, além de benefícios locais para a estrutura do tecido colágeno durante o reparo ósseo em condições osteoporóticas.