Cultura de tecidos nucelares, isolamento e radiossensitividade de protoplastos de Citrus sinensis (L.) Osbeck cv. Pera - Goldman, Maria Helena de Souza (1988)
O longo período de juvenilidade, a alta heterozigosidade, a escassez de conhecimentos sobre o modo de herança de muitas características de interesse, a auto-incompatibilidade, a esterilidade e a embrionia nucelar são sérios obstáculos para os programas de melhoramento das espécies cítricas. Uma abordagem recente para o melhoramento genético é baseada na cultura de tecidos, incluindo o uso de protoplastos, a mutagênese in vitro e a seleção in vitro de características desejadas. No presente trabalho, foram estudados os fatores envolvidos na obtenção de calos embriogênicos de Citrus sinensis cv. Pera. Foram cultivados nucelos e óvulos extraídos de frutos de diferentes idades após a antese, em quatro diferentes meios de cultura e nas condições de escuro e de luminosidade. Os explantes desenvolveram embrióides e plântulas, os quais originaram calos embriogênicos a partir da região do hipocótilo. Os nucelos apresentaram as maiores percentagens de formação de calos embriogênicos nas diversas condições de cultivo testadas. O aparecimento e a proliferação, o dos calos embriogênicos ocorreram em meios de cultura sem horm6nios vegetais. O uso do 2,4-D nos meios de cultura resultou na inibição da embriogênese nucelar in vitro. Houve o surgimento de calos, sem características embriogênicas, a partir dos tegumentos dos óvulos. Esta observação foi confirmada através de análises histológicas. Visando determinar as condições ideais para o isolamento de protoplastos viáveis, a partir dos calos embriogênicos otimização. Este método foi bastante eficaz, tendo aumentado cerca de 15 vezes a produção de protoplastos viáveis. As melhores condições experimentais para o isolamento foram: digestão enzimática por 5 horas, em meio com as enzimas cellulase 307,6 mg/10 ml e macerozyme 30,3 mg/10 ml, e os estabilizadores osmóticos manitol 328,0 mM e sacarose 336,2 mM. A eficiência de isolamento (1,2 x 10 6 protoplastos viáveis/g) alcançada com as condições experimentais otimizadas, possibilita que os protoplastos venham a ser empregados em programas de melhoramento do cultivar Pera. Os protoplastos foram submetidos a várias doses de radiação gama 42 horas após o isolamento, para uma verificação da sensitividade dos mesmos, tendo sido o valor de LD 50 estimado em torno de 37,5 Gy.