Efeitos de duas cepas probióticas em ratas ovariectomizadas com e sem periodontite experimental: estudo microtomográfico, histomorfométrico, imunohistoquímico e imunoenzimático - Lucateli, Ribamar Lazanha (2023)
O aumento na produção de citocinas pró-inflamatórias é um fator importante na patogênese e progressão da doença periodontal e da osteoporose. A modulação da expressão de marcadores do tecido ósseo e de permeabilidade intestinal por meio de probióticos pode ser uma potencial alternativa de tratamento quando ambas as condições estão associadas. O propósito deste estudo foi avaliar o efeito de dois agentes probióticos, Bifidobacterium animalis subs. Lactis HN019 (HN019) e Lacticaseibacillus casei 01 (LC01) em ratas ovariectomizadas (OVX) com e sem doença periodontal (DP) induzida por ligadura. Foram utilizadas 66 ratas divididas em 6 grupos (n=11): C-OVX (controle), C-OVX-HN019 (controle, com probiótico HN019), C-OVX-LC01 (controle, com probiótico LC01), DP-OVX (doença periodontal) e DP-OVX-HN019 (doença periodontal, com HN019), DP-OVX-LC01 (doença periodontal, com LC01). No dia 0 do experimento, todos os animais foram submetidos à OVX. Após 8 semanas, os animais dos grupos HN019 e LC01 receberam administração sistêmica da cepa probiótica (B. lactis HN019 ou L. casei 01), durante 8 semanas. 14 semanas após o início do experimento, foi induzida DP nos animais dos grupos DP-OVX, DP-OVX-HN019 e DP-OVX-LC01. Estes animais também receberam administrações tópicas da terapia probiótica no dia de colocação das ligaduras, e aos 3 e 7 dias após. Os animais foram eutanasiados 16 semanas após o início do experimento. Nos tecidos periodontais foram analisados a perda óssea e de inserção conjuntiva por meio de micro-CT e histomorfometria, e marcadores de metabolismo ósseo (fosfatase ácida resistente ao tartarato - TRAP, osteoprotegerina - OPG e ligante do receptor do ativador do fator nuclear kappa B - RANKL), por imunohistoquímica. Nos tecidos intestinais foram analisadas as alturas de vilosidade e profundidades de cripta, por meio de histomorfometria, e a expressão de marcadores de permeabilidade intestinal (E-caderina e Claudina-1), por imunohistoquímica. Os níveis de estradiol foram avaliados por meio de ensaio imunoenzimático. Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (p < 0,05). O grupo DP-OVX apresentou maior perda de osso alveolar, maiores razões RANKL/OPG, maior expressão de TRAP e menores níveis de estradiol quando comparado ao grupo C-OVX (p < 0,05). Considerando os grupos com DP e tratados com probióticos, apenas o grupo DP-OVX-LC01 apresentou maior área e volume de osso nas análises microtomográficas e histométricas quando comparado ao grupo DP-OVX (p < 0,05). Na análise de parâmetros que refletem a qualidade da microarquitetura óssea (análise microtomográfica), os grupos DP-OVX-LC01 e DP-OVX-HN019 demonstraram menor espaçamento de trabéculas ósseas, maior número de trabéculas ósseas e maior densidade de conectividade óssea quando comparados ao grupo DP-OVX (p < 0,05). O grupo DP-OVX-LC01 apresentou menor porosidade óssea quando comparado ao grupo DP-OVX-HN019 (p < 0,05). Uma menor expressão de TRAP e da razão RANKL/OPG, bem como maiores expressão de E-caderina e Claudina-1 e maiores níveis de estradiol foram observados nos grupos DP-OVX-LC01 e DP-OVX-HN019 quando comparados ao grupo DP-OVX (p < 0,05). No ambiente intestinal, considerando os grupos com DP e tratados com probióticos, apenas o grupo DP-OVX-LC01 demonstrou maior altura de vilosidades quando comparado ao grupo DP-OVX (p < 0,05). Um efeito da terapia probiótica foi também observado nos grupos sem DP. Apenas o grupo C-OVX-LC01 apresentou maior quantidade e melhor qualidade ósseas (análises microtomográficas), bem como maior expressão de OPG nos tecidos periodontais e maior profundidade de criptas e altura de vilosidades intestinais quando comparado ao grupo C-OVX (p < 0,05). Ambos os grupos C-OVX-LC01 e C-OVX-HN019 apresentaram menores níveis de estradiol no soro e maior expressão de E-caderina e Claudina-1 nos tecidos intestinais quando comparados ao grupo C-OVX (p < 0,05). Dentro dos limites desse estudo, pode-se concluir que: i) a terapia probiótica aumentou os níveis de estradiol e reduziu a permeabilidade intestinal em ratas ovariectomizadas e seus efeitos no osso alveolar e na morfologia intestinal foram cepa dependentes; ii) a cepa probiótica Lacticaseibacillus casei 01 foi mais efetiva que a cepa probiótica Bifidobacterium animalis subs. Lactis HN019 para a redução da destruição de osso alveolar decorrente da doença periodontal experimental em ratas ovariectomizadas.