Estudo do uso de células-tronco de linhagem neuronal em modelo experimental de lesão medular aguda - Santos, Gustavo Bispo dos (2023)
Introdução: A lesão da medula espinal é um grande problema de saúde pública com complicações clínicas e psicológicas devastadoras relacionadas à disfunção neuronal sensorial, motora e autônoma. Embora a laminectomia seja o procedimento cirúrgico padrão-ouro para descomprimir o canal medular, ele demonstra melhora clínica limitada em pacientes com medula espinal contusa ou seccionada. Portanto, várias abordagens têm sido estudadas para melhorar seu resultado clínico. Modelos experimentais de lesão medular têm sido utilizados ao entendimento da regeneração e reorganização promovida por diferentes tipos de terapias adjuvantes, farmacológicas ou pela aplicação de suportes químicos ou biológicos (scaffolding), fatores de crescimento e células-tronco. O modelo da contusão da medula espinal em ratos pela queda de peso (NYU-Impactor) foi anteriormente padronizado e validado por nosso grupo de pesquisa através da escala de avaliação motora Basso, Beattie e Bresnahan (BBB), consistindo hoje importante alicerce para pesquisas. Objetivos: O objetivo deste estudo foi avaliar, em período pós-operatório de seis semanas, a função motora de ratos que tiveram uma contusão moderada da medula espinal torácica (T8T9), seguida imediatamente de enxerto de células-tronco neurais de telencéfalo de rato neonato não diferenciadas ou 24 horas após início de tratamento para diferenciação neuronal. E como objetivo secundário o teste do scaffolding Matrigel® em associação às células. Métodos: Foram utilizados 60 animais divididos aleatoriamente em seis grupos, submetidos a laminectomia, sendo três grupos controle e três grupos experimentais. Associaram-se os seguintes procedimentos por grupo: (1) lesão medular, (2) lesão medular e meio de diferenciação neuronal em Matrigel® (veículo), (3) nenhum outro procedimento (sham), (4) lesão medular e células não diferenciadas em meio de diferenciação neuronal, (5) lesão medular e células não diferenciadas em veículo, e (6) lesão medular e neuroesferas não diferenciadas incubadas em veículo por 24 horas. Todos os animais foram submetidos à avaliação comportamental motora pela escala BBB em dois momentos: treinados previamente à intervenção cirúrgica e posteriormente semanalmente durante seis semanas. Após seis semanas, os animais foram submetidos ao sacrifício indolor e tiveram suas medulas ressecadas do segmento vertebral (T3L3). As medulas foram submetidas à fixação e, posteriormente, seções longitudinais e coloração com hematoxilina-eosina. Foram avaliados necrose, infiltrado celular, degeneração, hiperemia e hemorragia. Resultados: Como esperado, a laminectomia por si não afetou a função motora (grupo 3, sham). À avaliação no segundo dia pós-operatório, animais dos demais grupos apresentaram grave comprometimento da função motora conforme a escala BBB. A partir do final da quarta semana do período pós-operatório, houve melhora significativa na função motora de ratos com contusão moderada da medula espinal de todos os grupos. Nos grupos que receberam Matrigel®, com ou sem células de neuroesferas não diferenciadas, esta melhora foi significante de forma mais precoce, a partir do final da segunda semana pós-operatória. Dentre os cinco grupos cujos animais foram submetidos a laminectomia e lesão medular, animais que receberam Matrigel® e células-tronco neurais indiferenciadas (grupo 5) apresentaram escores mais elevados na escala BBB. A diferença entre pontuações BBB do final do período pós-operatório e o final da terceira semana foi superior para os animais do grupo 5 em relação a qualquer outro grupo. Os parâmetros histológicos não diferiram significativamente entre grupos. Conclusão: A melhora funcional motora em ratos com lesão contusa em T8T9 da medula espinal foi mais significativa quando Matrigel® foi combinado a células não diferenciadas de neuroesferas no enxerto imediatamente após lesão