Identificação de SNPs e associação com número de oócitos colhidos por aspiração folicular em bovinos da raça Nelore - Santos-Biase, Weruska Karyna Freitas (2008)
O Brasil é o país que mais realiza aspiração folicular de oócitos guiada por ultrasonografia (OPU) para fins de produção in vitro de embriões bovinos. Com isso é possível aumentar consideravelmente o número de progênies por fêmea por ano. O objetivo desse trabalho foi identificar polimorfismos em genes envolvidos na foliculogênese e associar alterações gênicas com o número de folículos pré-antrais recrutados em bovinos, estimados pelo número de oócitos recuperados por OPU. Dados de aspiração folicular feitas a campo em fêmeas Nelore (Bos taurus indicus) foram obtidos de duas empresas diferentes, sendo que 30 fêmeas foram utilizadas para a prospecção de polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs), 218 para estudos populacionais e dados de 193 fêmeas foram utilizados para a análise de efeitos das variações genéticas com o número de oócitos viáveis colhidos por OPU. Vinte fêmeas da raça Holandesa (Bos taurus taurus) foram genotipadas para a identificação de alelos taurinos ou zebuínos específicos. Regiões dos genes Gdf9, Fgf8, Fgf10 e BmprII foram amplificadas por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR) e seqüenciadas para prospecção de SNPs. Quatro polimorfismos foram genotipados por meio de restrição enzimática de DNA, (PCR-RFLP; genes: Gdf9, Fgf8, Lhr e DNA mitocondrial-mtDNA) ou PCR em tempo real utilizando sondas específicas para cada alelo (BmprII). A avaliação de efeitos dos marcadores sobre a característica foi realizada por análise de variância utilizando modelos mistos com dados repetidos, em que o número de oócitos viáveis foi considerado variável dependente, as fêmeas foram consideradas variável aleatória, e local de aspiração, ano de aspiração e o SNP foram efeitos fixos. O mesmo modelo foi utilizado para estimar efeito médio de substituição alélica, em que o marcador foi substituído por uma co-variável numérica. A diferença entre médias de quadrados mínimos foram estimadas por meio de contrastes e a significância avaliada por teste t. Os efeitos ou as diferenças entre as médias foram consideradas significativas quando P<0,05. Foram identificados 19 SNPs sendo que 10 polimórficos entre as fêmeas Nelore, 04 causadores de substituição de aminoácidos na proteína. Entre os marcadores nucleares genotipados (Gdf9, A318C; Fgf8, C1027G; BmprII, A40048G; Lhr C62478T), todos apresentaram equilíbrio de segregação alélica dentro do marcador e genotípica entre os marcadores (P>0,05). Os SNPs nos genes Gdf9, BmprII e Lhr genotipados em fêmeas Nelore e Holandesas apresentaram-se fixados na segunda raça. Foram identificados efeitos dos polimorfismos dos genes Gdf9, Fgf8, BmprII e Lhr (P<0,05), entretanto os variantes de mtDNA não foram significativos. As diferenças entre médias confirmaram os resultados da ANOVA. Para os polimorfismos no gene Gdf9, BmprII e Lhr, observou-se a tendência de os indivíduos heterozigotos terem menores médias de oócitos viáveis quando comparados aos homozigotos, já o polimorfismo no gene Fgf8, observou-se a tendência de interação aditiva entre os alelos, em que foi estimado um efeito médio de 1,13±0,01 oócitos viáveis por troca de alelo C por G. Conclui-se que variações genéticas são causas de variabilidade do número de folículos presentes nos ovários, estimados por OPU.