Impacto do estresse de cisalhamento na interação entre células endoteliais e vesículas extracelulares tumorais: abordagens in vitro e in silico - Villarinho, Nícolas Jones (2025)
O câncer de mama é o tipo de tumor mais frequente entre mulheres, tendo o subtipo triplo negativo (TNBC) como o mais agressivo e associado a alta mortalidade sobrevida quando metastático. A metástase consiste no espalhamento do tumor através da circulação, envolvendo Intravasamento e extravasamento de células tumorais pelo endotélio. Acredita-se que vesículas extracelulares (EVs) liberadas por células tumorais tenham um papel no preparo do nicho metastático. As EVs modulam o microambiente tumoral, aumentando a permeabilidade de células endoteliais (ECs) e permitindo a passagem de células tumorais. Além disso, o fluxo sanguíneo gera um estresse de cisalhamento (FSS) que influencia a adesão e extravasamento das células tumorais. Nosso objetivo foi investigar como pequenas EVs (SEVs) interagem e são internalizadas por ECs usando abordagens in silico e in vitro. Para isso, expusemos células endoteliais de veia de cordão umbilical humano (HUVEC) a um FSS de 20 dyn/cm² e, em seguida, realizamos análises proteômicas. Em paralelo, analisamos EVs isoladas da linhagem de TNBC MDA-MB-231, simulando interações proteína-proteína entre HUVEC e SEVs com foco nas vias endocíticas. In vitro, modificamos a MDA-MB-231 para expressar a proteína CD63 de SEVs fusionada à mScarlet. Após isolamento de SEVs por ultracentrifugação com gradiente de densidade, caracterizamos essas vesículas e investigamos sua internalização em HUVEC na presença de inibidores de endocitose (Dynasore, MCD e Pitstop2) no modelo estático. Além disso, silenciamos a Caveolina-1 (CAV-1) e a cadeia pesada da clatrina (CLHC) em HUVEC para avaliar a captação de SEVs sob condições estáticas ou de FSS. Os resultados indicaram que o FSS promove uma transição de HUVEC para uma morfologia alongada, reduzindo estímulos proliferativos e angiogênicos e favorecendo características relacionadas à adesão celular e interação com o microambiente. Análises in silico revelaram que proteínas de SEVs interagem com proteínas endocíticas de HUVEC, destacando a importância da endocitose mediada por clatrina (CME) e caveolina (CavME). A internalização de SEVs foi inibida por MCD e Pitstop2 em condições estáticas. O knockdown de CAV-1 e CLHC reduziu a captação de SEVs no modelo estático, mas aumentou sob FSS. Observamos que SEVs se acumulam em junções aderentes de HUVEC sob FSS, sugerindo um possível mecanismo de redução da permeabilidade endotelial. Este estudo demonstrou o envolvimento das vias CME e CavME na captação de SEVs de TNBC por HUVEC sob diferentes condições de FSS. Os achados oferecem insights para o desenvolvimento de terapias baseadas em nanopartículas, utilizando marcadores de EVs tumorais e vias endocíticas para entrega de agentes terapêuticos.