Análise de mutações nos genes relacionados com resistência a isoniazida (INH) em isolados clínicos de \'Mycobacterium tuberculosis\' de origem brasileira - Cardoso, Rosilene Fressatti (2003)
No presente estudo realizou-se a triagem para detecção de mutações nos genes katG, kasA, inhA, e região intergênica oxyR-ahpC pela PCR-SSCP e a confirmação por seqüenciamento semi-automático, em 97 isolados resistentes e 60 sensíveis a INH, de M. tuberculosis de origem brasileira. Foi também, investigado a freqüência destas mutações. A determinação da concentração inibitória mínima (CIM) para os isolados resistentes foi realizada pela técnica de Alamar Blue (MABA). A caracterização molecular dos isolados sensíveis e resistentes a INH, foi feita por \"Spoligotyping\" da região hipervariável locus DR. Foi obtido 40 diferentes padrões de \"Spoligotyping\" para os 97 isolados clínicos resistentes e um total de 30 para os 60 isolados sensíveis de M. tuberculosis. Nenhum isolado estudado apresentou o gene katG deletado na integra. No entanto, encontrou-se um isolado com deleção na região 3\' neste gene e uma alta porcentagem de mutação (85,6%); principalmente no codon 315 (61,9%). Foram detectadas 25 novas mutações ainda não descritas na literatura entre os isolados resistentes, no gene KatG, assim como 25,8% dos isolados resistentes apresentaram mutação na região promotora e 5,82% na região estrutural do gene inhA e 10,3% na região intergênica oxyR-ahpC sendo uma mutação (-48) ainda não descrita na literatura. No gene kasA, foram observadas mutações tanto em isolados sensíveis como em resistentes a INH. A mutação mais frequente observada nesse gene foi no codon 269 que causou a alteração G269S (23,7%). Algumas mutações silenciosas, em menor porcentagem, foram detectadas somente nos isolados sensíveis. A técnica de PCR-SSCP demonstrou boa sensibilidade, detectando 90, 7% das mutações analisando 5 regiões gênicas (região adjacente ao codon 315 do gene katG, região promotora e estrutural do gene inhA e região intergênica oxyR-ahpC). Concordância de 100% foi verificado entre as técnicas de PCR-SSCP e de seqüenciamento. Portanto pode-se concluir que a triagem por PCR-SSCP pode ser utilizada com segurança para essa finalidade.