Mosaico da cana-de-açúcar: algumas estirpes do patógeno ocorrentes no estado de São Paulo e sua caracterização - Matyis, Jose Carlos (1988)
Plantas de cana-de-açúcar com sintomas de mosaico foram coletadas no campo, e, com os extratos das folhas, foram efetuadas diluições em serie e inoculações sucessivas em plantas de milho, com a finalidade de separar prováveis misturas de estirpes. Posteriormente, isolados provenientes das plantas de milho foram inoculados na variedade de cana diferenciadora CP 28-60. Três sintomas diferentes foram obtidos e denominados de estirpes I, III e IV. O ponto final de diluição para esses isolados foram, respectivamente, 10-2, 10-1 e 10-3, e o ponto de inativação térmica 54°, 52° e 56°C. Esses isolados também apresentaram comportamentos diferentes em variedades comerciais CB 40-13, NA 56 - 79 e CB 47-355. Para a purificação física dos vírus de cada isolado, foram utilizadas plantas de milho inoculadas, cujas folhas, com sintomas, foram colocadas em nitrogênio líquido e solução de sulfito de sódio 0,01M, para obtenção de extrato. Este foi clarificado com centrifugações, éter etílico, ajuste do pH a 4,7 com HCl 0,1M e centrifugação, troca para pH 7,0 com tampão Tris-HCl 0,2M pH 9,0. A preparação purificada foi obtida depois de dois ciclos de centrifugação-ultracentrifugação e resuspensa em tampão fosfato 0,01M pH 7,0. A curva de absorção em luz ultravioleta revelou um pico a 265 nm e um mínimo a 245 nm. A microscopia eletrônica revelou partículas alongadas com média de 719, 732 e 747 nm, respectivamente, para os isolados I, IV e III. Anti-soro foi obtido, injetando, intramuscularmente, em coelho, emulsão contendo preparações do vírus. Para os estudos serológicos, o antígeno foi resuspenso em tampão Tris-HCl 0,01M pH 7,2 em solução salina. Testes de microprecipitina, embaixo de óleo mineral, revelaram titulas diferentes entre os três dos. A difusão, em gel-ágar, contendo SOS, NaCl em tampão Tris 0,1M pH 9,0, apresentou reações semelhantes entre os tris isolados.