Dry blood spots como ferramenta de amostragem: aplicações em ensaios clínicos avaliando o metabolismo pós-prandial - Duarte, Stephany Gonçalves (2024)
Uma forma de se obter informações mais detalhadas a respeito do estado de saúde é observar as respostas a certos estímulos, que podem ser melhores indicadores do que parâmetros analisados na ausência de estímulo. A ingestão de uma refeição (execução de um desafio dietético) é um exemplo de um desafio metabólico que pode induzir tais perturbações, uma vez que no período pós-prandial observam-se alterações transientes do metabolismo intermediário para que o organismo possa acomodar as alterações na disponibilidade de substratos energéticos. Os dry blood spots (DBS) são uma alternativa pouco invasiva para coleta de sangue, que apresenta baixo custo, alta estabilidade da amostra mesmo à temperatura ambiente, favorecendo a execução de estudos clínicos e rotina hospitalar. Essa tese de doutorado foi desenvolvida buscando validar a utilização de DBS em estudos clínicos em que amostras de sangue foram coletadas durante um desafio dietético. Nesse trabalho, 3 estudos foram conduzidos: 1) o primeiro buscou avaliar o efeito da suplementação com D-limoneno, o principal monoterpeno encontrado em frutas cítricas, no metabolismo pós-prandial. Em modelos animais, esse composto induz alterações positivas no metabolismo de carboidratos e lipídios e, por isso, esperávamos encontrar efeitos benéficos no estudo clínico. 2) o segundo estudo teve como objetivo encontrar marcadores da desregulação da resposta glicêmica pós-prandial analisando as amostras de DBS coletadas durante um desafio dietético em uma plataforma de metabolômica não-dirigida baseada em cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas. 3) finalmente, realizamos um estudo com a intenção de comparar alterações no lipidoma de amostras de plasma e DBS coletadas simultaneamente durante um desafio dietético. Ao todo, 100 pessoas participaram do estudo que invariavelmente envolveu a realização de um desafio dietético que consistiu na ingestão de uma refeição hiperlipídica e hiperglicídica e coleta de sangue capilar durante 2,5 horas após a ingestão da refeição. No caso do estudo com D-limoneno, houve um protocolo de suplementação com o monoterpeno por 2 semanas entre dois desafios dietéticos. Os resultados dos estudos indicam que a utilização de DBS como estratégia de coleta de amostras de sangue é viável em estudos que tenham como objetivo analisar o metabolismo pós-prandial, visto que alterações nas concentrações circulantes de metabólitos de diferentes classes químicas são detectáveis nessa matriz. Além disso, constatamos que a suplementação com 2 g de D-limoneno não induz alterações no metabolismo pós-prandial. Também demonstramos que metabólitos marcadores de resistência a insulina como aminoácidos de cadeia ramificada e derivados do metabolismo da glicose podem ser detectados em amostras de DBS coletadas de indivíduos com resposta glicêmica pós-prandial aumentada. Finalmente, demonstramos que amostras de DBS permitem observações similares das alterações no metabolismo de lipídios durante o período pós-prandial que amostras de plasma. Esses resultados reforçam a viabilidade da utilização dos DBS em estudos clínicos, como uma alternativa custo-efetiva à coleta de sangue venoso, abrindo novas perspectivas de utilização dessa estratégia amostral. Esse trabalho também traz novas evidências que contribuem para o entendimento da fisiologia do estado pós-prandial.