Clonagem de um alelo do gene SPT15 em Saccharomyces cerevisiae para aumento da produção de etanol. - Dalmolin, Keina Poliana Pivarro (2011)
Alper e colaboradores demonstraram que a linhagem BY4741 recombinante portadora de cópias adicionais de um alelo SPT15 mutagenizado em três diferentes posições (spt15-300) utiliza mais rapidamente a glicose e aumenta a produção de etanol. Neste trabalho, foi realizada a clonagem deste alelo, aqui chamado spt15*. Inicialmente o DNA genômico da linhagem S. cerevisiae S288C foi utilizado como molde para amplificação por SOEing-PCR. O alelo spt15* foi clonado no plasmídeo pGEMT-Easy e, em seguida, introduzido no plasmídeo epissomal pMA91. Após construções moleculares, foi obtido o fragmento de DNA dpPGKspt15*tPGKd, empregado na transformação genética, da linhagem S. cerevisiae YPH252, por d-integração. Os clones recombinantes YHP252/pMA91spt15* e YHP252/dpPGKspt15*tPGKd consomem mais eficientemente a glicose e aumentam a produção de etanol. O seqüenciamento do alelo SPT15 da levedura industrial PE-2 revelou 100% de identidade com o alelo das linhagens BY4741 e S288C, criando ótimas perspectivas para trabalhos futuros.