Efeito de distintas moléculas coestimulatórias na ativação de células modificadas com um receptor antigênico quimérico específico para manana - Moura, Edanielle Silva de (2025)
As infecções fúngicas invasivas (IFIs) representam um impacto significativo para a saúde pública, uma vez que podem resultar em infecções fatais e ocasionar considerável morbidade em casos de doenças fúngicas de longa duração. Estima-se que 6,5 milhões de pessoas sejam afetadas por infecções fúngicas invasivas, com uma taxa de mortalidade anual de 3,8 milhões. Apesar desses números alarmantes, as infecções fúngicas continuam frequentemente negligenciadas pela comunidade médica global. Atualmente, o arsenal antifúngico disponível concentra-se em três classes principais de medicamentos: os polienos, azóis e equinocandinas. A eficácia desses medicamentos enfrenta limitações significativas, incluindo toxicidade ao hospedeiro, farmacocinética desfavorável e espectro de atividade restrito. Ademais, observa-se uma resistência crescente aos antifúngicos, bem como o surgimento de patógenos multirresistentes, o que torna imprescindível o desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas. Com isso, nosso grupo de pesquisa tem avançado na bioengenharia de células T para expressar receptores antigênicos quiméricos (CAR) que redirecionam as células modificadas especificas para o reconhecimento com manana. Com isso, este trabalho busca avaliar o efeito de diferentes variantes de M-CAR, através da construção de CAR de segunda geração, com modificação no domínio de ativação intracelular via as moléculas co-estimulatórias CD28, CD137 e ICOS. Os plasmídeos referentes aos construtos de M-CAR foram utilizados na produção de partículas lentivirais após a co-transfecção de células HEK293T. Células Jurkat transduzidas pelo método de espinoculação foram incubadas com leveduras inativadas de P. brasiliensis ou hifas inativadas de C. albicans, e a quantificação dos níveis de IL-2 no sobrenadante do co-cultivo demonstrou que as células modificadas foram ativadas na presença de C. albicans e o construto M-CD137z-CAR induziu maior nível de ativação celular. Além disso, o construto M-CD137z-CAR induziu um maior nível de ativação de células T na presença de C. albicans, C. glabrata, C. tropicalis, C. parapsilosis e P. brasiliensis quando comparado ao construto M-ICOSz-CAR. Ao avaliar a expressão de CD69, marcador precoce de ativação celular, em células modificadas com M-CD137z-CAR e incubadas com P. brasiliensis, detectamos um aumento significativo na expressão de CD69 comparado com as células não modificadas e incubadas com as leveduras de P. brasiliensis. Células NK92 foram transduzidas com o construto M-ICOSz-CAR e incubadas na presença de manana solúvel (10ug/ml) ou hifas de C. albicans inativadas e após 24h ou 48h o sobrenadante foi utilizado para mensuração dos níveis de IFN-γ. Células NK-iCOSz apresentaram uma intensa produção de IFN-γ, após incubacao com manana solúvel ou hifas de C. albicans, comparado com células controle NK92. Células modificadas com o construto M-CD28z-CAR não apresentaram níveis significantes de ativação celular.