O impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro, vitrificação de oócitos e suplementação dos meios de vitrificação com L-carnitina e ácidos graxos no perfil lipídico de oócitos e blastocistos murinos - Berteli, Thalita Souza (2022)
Objetivo: Objetivamos investigar os efeitos do tempo de equilíbrio do protocolo de vitrificação e o impacto de um meio de vitrificação suplementado com ácidos graxos (AG) e L-carnitina (LC) no desenvolvimento embrionário e perfil lipídico de oócitos murinos. Adicionalmente, analisar o impacto da estimulação ovariana, fertilização in vitro (FIV) e vitrificação de oócitos com meio padrão e suplementado com AG e LC no perfil lipídico de blastocistos murinos. Material e métodos: Estudo experimental incluindo 936 oócitos murinos C57BL/6J, divididos aleatoriamente em FIV fresco (CTR) e grupos de exposição à solução de equilíbrio (ES). Os oócitos foram expostos ao ES dos meios Irvine (IRV), Tvitri-4 (T4) ou T4 suplementado com LC e AG (T4-LC/FA) por 7 ou 10 minutos, vitrificadosaquecidos e submetidos à FIV. Também avaliamos o perfil lipídico de oócitos imediatamente após a exposição a solução de equilíbrio (ES) utilizando os mesmos tempos de equilíbrio. O desenvolvimento embrionário, a análise do perfil lipídico do oócito e análise da via lipídica foram comparados entre os grupos. Também comparamos o perfil lipídico de blastocistos produzidos in vivo a partir de ciclos naturais de acasalamento (N), produzidos in vivo após superovulação (S) e acasalamento, ou produzidos in vitro após superovulação e FIV. Para os experimentos in vitro, oócitos foram divididos aleatoriamente em 4 grupos: oócitos frescos fertilizados in vitro e grupos vitrificados utilizando os meios de vitrificação descritos previamente. Oócitos frescos ou vitrificados/aquecidos foram inseminados e cultivados in vitro. O perfil lipídico dos oócitos e blastocistos foi avaliado por meio de perfil de monitoramento de reações múltiplas (MRM). Resultados: O maior tempo de equilíbrio resultou em menores taxas de sobrevida oocitária e formação de blastocistos, redução da abundância relativa de lipídios estruturais, como fosfatidilcolinas e esfingomielinas, variando de acordo com a composição de ES. Também induziu a formação bolhas na superfície do oócito predominantemente em IRV, raramente em T4 e ausentes em T4-LC/FA. A fim de revelar as vias metabólicas associadas à fase de equilíbrio da vitrificação, a análise da via lipídica foi realizada e ambos, valores de p e valores de impacto das vias mostraram que o metabolismo do ácido linoleico (p=0.00223; impacto =1) e metabolismo do ácido alfalinoléico (p=0.00084; impact = 0.33) foram as vias mais impactadas, seguida do metabolismo dos glicerofosfolipídios (p=0.0167; impact = 0.25). A estimulação ovariana somente ou associada à FIV promoveu um enriquecimento de fosfolipídios saturados em blastocistos. A vitrificação resultou em uma abundância relativa reduzida de fosfolipídios e esfingolipídios em comparação com blastocistos gerados a partir de oócitos frescos de FIV. Conclusões: Uma fase de equilíbrio mais longa pode influenciar o desenvolvimento embrionário e induzir mudanças na composição lipídica do oócito relacionadas à integridade da membrana. Os resultados sugerem internalização dos ácidos oleico e linoléico adicionados ao ES pelo oócito e, de certa forma, parecem contribuir para a preservação dos fosfolipídios da membrana, independentemente dos tempos de equilíbrio avaliados. Várias classes de fosfolipídios foram afetadas em blastocistos pela S, FIV e/ou vitrificação de oócitos, e mesmo um curto tempo de exposição às soluções à base de lipídios durante a vitrificação do oócito foram suficientes para induzir alterações no perfil lipídico que foram sustentadas até estágio de blastocisto.