Aspectos genéticos da fixação assimbiótica de nitrogênio em bactérias do solo - Nascimento, Gislene Garcia Franco do (1985)
Foi feito um estudo dos genes envolvidos como processo de fixação assimbiótica de N2, em populações bacterianas selvagens do solo, com o intuito de se verificar a ocorrência de genes nif plasmidiais, ou mesmo cromossomais, que pudessem ser transferidos para outros sistemas não fixadores. Foi observada a presença de plasmídeos nos isolados naturais 2-2II, 5-3 e 40-1 com pesos moleculares de 64,40 e 92 Md, respectivamente, revelados por eletroforese em gel de agarose. Em nenhuma destas linhagens se detectou a presença de genes plasmidiais envolvidos com o processo de fixação de N2, uma vez que após a eliminação dos plasmÍdios com agentes de cura, estas continuaram seu desenvolvimento normal em meio isento de nitrogênio incorporado. A maior porcentagem de eliminação de plasmídios foi conseguida atrvés do tratamento com temperatura de 44ºC (2 a 10%), seguida do tratamento com brometo de etídio (1 a 5%), sendo menores as obtidas com acriflavina (0,5 a 1%) e acridina laranja (0,2 a 0,8%). Pode-se verificar que a presença, assim como o tamanho dos plasmÍdios presentes, não foi uma constante, pois variaram com a espécie, mostrando a grande variabilidade genética deste material. O isolado selvagem 9, não portador de plasmídio, classificado como Azotobacter paspali, foi estudado sob vários aspectos genéticos. Teve-se como objetivo, a localização dos genes nif nesta bactéria, procurando-se ainda uma similaridade com outras espécies do mesmo gênero, bem estudadas geneticamente. Neste sentido, inicialmente foram isolados alguns mutantes auxotróficos e nif - (incapazes de fixar N2), a partir da indução com luz ultravioleta tratamento com ácido nitroso. A localização de algumas mutações nif foi possível através da transformação destes mutantes nif - com DNA de A. paspali selvagem e mutante, verificando-se que os genes estavam ligados na maioria dos casos. Também foram obtidos transformantes nif + de Escherichia coli, utilizando-se DNA de A. paspali, os quais apresentaram reduzida atividade de nitrogenase, avaliada pela redução do acetileno. Estes transformantes nif + foram ensaiados posteriormente, em vários processos de conjugação, com linhagens de E. coli. A partir desses experimentos, pode-se verificar que o sistema estudado apresenta algumas similaridades com outras espécies de Azotobacter, no que diz respeito à localização dos genes nif no genoma bacteriano. No entanto, a ocorrência de transformantes nif + de E. coli, sugere que a maioria dos genes nif funcionais estão em um grupo passível de ser transferido por um único segmento de DNA.