Estabelecimento de uma nova plataforma de apresentação de antígenos Multiple Antigen Presenting System (MAPS) aplicados a antígenos vacinais de Schistosoma mansoni - Barbosa, Mayra Mara Ferrari (2020)
A esquistossomose é uma das mais importantes doenças parasitárias em termos de morbidade e mortalidade. Nos últimos anos, as pesquisas por vacinas foram impulsionadas por avanços em estudos de proteômica e transcriptômica do S. mansoni, identificando genes/proteínas como potenciais candidatos vacinais contra a esquistossomose. Entretanto, os estudos desenvolvidos até o momento indicam a necessidade de aumentar a imunogenicidade desses antígenos. O objetivo deste trabalho foi estabelecer e investigar um novo sistema de apresentação de múltiplos antígenos (MAPS). Este sistema se baseia numa abordagem de acoplamento à base de afinidade, expressando os antígenos-alvo em fusão com a proteína de ligação à biotina, Rhizavidina (Rhavi). Neste caso, utilizamos como matriz vesículas de membrana externa (OMV) obtidas a partir de Neisseria lactamica. Inicialmente, foram construídos os vetores de expressão de sete antígenos. Foram avaliadas diferentes cepas de E. coli e meios de cultura, selecionando E. coli BL21-DE3 e Terrific broth para a realização de desenhos experimentais estatisticamente planejados. Foram estabelecidos as condições de cultivo com maior rendimento de expressão dos antígenos SmTSP-2 e SmCD59.2, utilizados como prova do princípio. As proteínas recombinantes solúveis foram obtidas em concentrações elevadas, purificadas por cromatografia de afinidade e detoxificadas para eliminação do LPS. Em paralelo, as OMVs foram obtidas a partir dos cultivos de N. lactamica, detoxificadas e conjugadas com biotina. Os complexos MAPS-OMV-SmTSP-2 e MAPS-OMV-SmCD59.2 foram obtidos por acoplamento, purificados por cromatografia de gel filtração e caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão. Os ensaios in vitro com células dendríticas derivadas da medula óssea de camundongos C57Bl/6 e com monócitos e macrófagos humanos demonstraram que os MAPS induziram um perfil de citocinas inflamatórias mais elevado que as proteínas recombinantes. Ensaios in vivo com o complexo MAPS-OMV-SmTSP-2 mostraram uma elevada produção de anticorpos IgG específicos contra o antígeno SmTSP-2, com perfil de isotipos IgG1/IgG2c indicando capacidade balanceada de ativação dos dois braços da resposta imune Th1 e Th2. Os ensaios preliminares indicam o elevado poder adjuvante dos complexos MAPS-OMV-SmAg.