Análise de compostos policíclicos aromáticos (CPAs) em plasma por cromatografia líquida de alta eficiência - Machado, Rosecler Pereira (2001)
Neste trabalho, teve-se como objetivo desenvolver e validar uma metodologia analítica para a determinação de compostos policíclicos aromáticos (CPAs) em plasma sangüíneo de trabalhadores ocupacionalmente expostos. Foram estudados os dezesseis CPAs considerados como contaminantes prioritários por instituições americanas na área do meio ambiente particularmente, o EPA (Environmental Protection Agency). Os parâmetros analíticos estudados na otimização do sistema cromatográfico CLAE-UV/DAD e CLAE/Fluorescência incluíram: sistema eluente, tipos de colunas, vazão e composição da fase móvel e comprimentos de onda. A melhor coluna foi a RP-GROM-STL PAH (250 mm × 4,6 mm × 5 µm) com coluna guarda C18 (2 cm × 2,1 mm × 5 µm), gradiente 07 min com 50%, 715 min com 5085% e 1520 min com 85100% de ACN a 1,8 mL min-1, temperatura do forno 35 ºC e detecção em 260 nm. Para o sistema CLAE/Fluorescência utilizou-se da mesma coluna e coluna guarda nas mesmas condições de eluição no sistema UV/DAD, variando-se apenas os comprimentos de onda de excitação e emissão para cada composto. A melhor programação foi: 0,0 min 280/324 nm; 10,5 min 250/370 nm; 11,9 min 254/400 nm; 13,2 min 287/460 nm; 14,0 min 336/394 nm; 16,5 min 280/387 nm; 17,2 min 265/380 nm; 18,5 min 296/404 nm; 23,0 min 300/466 nm. A metodologia empregada para o preparo de amostra foi primeiramente a Extração Líquido-Líquido (ELL), como extração padrão, e a Extração em Fase Sólida (EFS), como um método alternativo para comparação. Para o preparo das amostras foram testados vários tipos de solventes como, por exemplo, diclorometano, hexano, tetracloreto de carbono, acetonitrila e clorofórmio, assim como volume de solvente extrator e tempos de agitação e centrifugação. Após o método de preparo de amostra estar estabelecido, o mesmo foi submetido à validação. Para tal, foram estudados as curvas analíticas seca e extraída, a linearidade das mesmas (todas com correlação linear r > 0,98) e determinou-se os limites de detecção (0,04 à 1,520 µg mL-1) e quantificação (0,124 à 4,564 µg mL-1) além da recuperação (76% à 94%). Toda a validação foi repetida em sistemas inter e intraensaios, sempre obtendo-se coeficientes de variação menores do que 10%.