Células-tronco mesenquimais irradiadas: influência do efeito espectador sobre os controles da hematopoese - Amon, Rosana Lopes Rodrigues (2024)
O processo de hematopoese compreende a produção de células sanguíneas e tem como protagonista o microambiente hematopoético (MH). No MH tem-se a participação do sistema hematopoético, compreendido principalmente pelas célulastronco hematopoéticas (CTH), e o sistema estromal, de sustentação e suporte para a hematopoese, com seu principal representante: a célula-tronco mesenquimal (CTM). Dentro desse contexto, caracteriza-se a CTM como reguladora de outros tipos celulares, sendo de suma importância na modulação das CTH. Com isso, faz-se importante relatar que malignidades hematopoéticas podem afetar o MH e a radiação é uma importante ferramenta terapêutica. Neste âmbito, o processo de radioterapia não atinge somente as células neoplásicas presentes no MH, como também as CTM saudáveis, que podem sofrer alterações e modularem, através do efeito espectador, as CTH. Este efeito se caracteriza por células não irradiadas que apresentam alterações em sua fisiologia promovidas por células diretamente irradiadas. Desta forma, CTH, que têm como objetivo reestabelecer a hematopoese após o tratamento radioterápico, podem sofrer modificações na proliferação e diferenciação devido ao efeito espectador. Tendo isso, o objetivo geral deste trabalho foi avaliar a influência direta da radiação nas CTM e se estas células modulariam, através do efeito espectador, o processo de hematopoese. Para tal, foram realizadas culturas de linhagem mesenquimal (C3H10T1/2) que foram submetidas a irradiação, e, posteriormente, após suas avaliações, foram realizadas culturas condicionadas com os sobrenadantes irradiados e células de linhagem hematopoética (C1498). Como metodologias, a cultura 3D, a citometria de fluxo para viabilidade e ciclo celular, o PCR e imunofenotipagem, foram utilizados para caracterizar as alterações nas C1498 frente ao efeito espectador. E, através da citometria de fluxo, foi possível caracterizar que as CTM sofrem alteração a partir da dose de 6Gy, pela avaliação do ciclo celular e viabilidade. A modulação gênica apontou aumento da expressão de Bax e Cdkn1a em CTM irradiadas a partir de 6Gy. O marcador γ-H2AX também se mostrou alterado em CTM irradiadas. Dentre os fatores solúveis produzidos pelas CTM irradiadas, apenas a IL-6 apresentou diminuição de sua síntese quando estas células eram irradiadas, principalmente, com 6Gy. Frente a modulação espectadora, as células C1498 tiveram diminuição da capacidade clonogênica em cultura 3D em relação a quantidade de colônias formadas e sua densidade, diminuição da expressão gênica de Ccnd1 e Gata-3, bem como diminuição destas células nas fases S/G2/M do ciclo celular, e alteração das suas características imunofenotípicas com diminuição de células marcadas com CD3, sendo todas estas modulações nas C1498 promovidas pelas CTM irradiadas com 6Gy, em ambiente estimulado com G-CSF. Por conseguinte, haja vista a importância das CTM em modular as células hematopoéticas, em uma situação de irradiação, CTM modulam negativamente células hematopoéticas, diminuindo proliferação e diferenciação linfoide destas células.