Determinação do sítio intracelular de síntese do RNA do vírus do Anel do Pimentão através de auto-radiografia a nível de microscopia eletrônica - Nogueira, Neusa de Lima (1978)
Na presente tese foi estudado o local de replicação do RNA do vírus do Anel do Pimentão (VAP) associando-se as técnicas de auto-radiografia e microscopia eletrônica. Tecidos foliares de Nicotiana tabacum L, var. Turkish NN sadios e com VAP foram incubados com Actinomicina D (AMD) ou agua e a seguir tratadas com uridina tritiada (atividade específica 29,2 curies/m mol) durante três intervalos de tempo, 3, 5 e 9 horas. Depois de fixados com glutaraldeido e ácido ósmico foram desidratados com acetona 30, 50, 70, 90 e 100% e incluídos em resina Epon. Os cortes ultrafinos e semifinos foram cobertos com emulsão fotográfica e apôs tempo de exposição adequado foram revelados e examinados. A produção de grãos de prata reduzida (grãos ) devido a incorporação de uridina -5-3H (U-5-3H) no RNA permitiu contagens que, analisadas quantitativamente, serviram para identificar o local de replicação do RNA viral. Os resultados obtidos indicaram que: 1. O efeito dos tratamentos utilizados sobre as áreas médias das secções das células foliares e as áreas médias de seus constituintes não apresentam diferença estatística significativa a nível de 1% de probabilidade. 2. A densidade dos grãos de prata da célula afetada pelo VAP e tratada com água indica que a síntese de RNA sofre uma redução no período de 3 a 5 horas de incubação com U-5-3H e que a taxa de redução no período de 5 a 9 horas é semelhante entre célula doente e sadia. 3. O tratamento dos tecidos foliares sadios e doentes com AMD revelou que a ação do antibiótico foi seletiva no sentido de inibir a polimerase dependente do DNA e não a replicasse do RNA viral, permitindo acompanhar com melhor aproximação o curso da biossíntese do RNA do VAP. 4. O estudo do comportamento individual de três regiões da célula sadia ao tratamento com AMD, mostrou, pela comparação dos números de grãos de prata por unidade de área, que a atividade de síntese do RNA no nucléolo foi a mais inibida pelo antibiótico, seguindo-se a do citoplasma e a do núcleo. 5. As densidades dos grãos de prata das organelas da célula afetada tratada com AMD e corrigidas com respeito às densidades da célula sadia inibida com AMD, mostraram que o curso da biossíntese do ácido nucléico no núcleo (excluindo o nucléolo) e no citoplasma é bastante semelhante, diferindo do processo biossintético do RNA no nucléolo. 6. Examinando as taxas de síntese do RNA da célula afetada pelo VAP, tratada com AMD e corrigida com os respectivos valores da célula sadia nas mesmas condições e no período de 3 a 5 horas, observou-se que a taxa de síntese no nucléolo é aproximadamente três vezes a do citoplasma e a do núcleo sem nucléolo. 7. Os dados da tese sugerem que embora alguma síntese do RNA ou ácidos nucléicos devidos a presença do VAP possa ocorrer no núcleo da célula infectada, o nucléolo é o local principal da biossíntese do RNA do VAP. 8. As auto-radiografias revelaram também que a translocação do RNA marcado do VAP já pode ser observada nas proximidades do mitocôndria no período de 5 horas de tratamento com U-5-3H.