Ativação do receptor do tipo Toll 4 em macrófagos medeia o desenvolvimento da dor neuropática induzida por paclitaxel - Adjafre, Beatriz Lima (2024)
A dor neuropática é uma doença do sistema somatossensorial que se desenvolve a partir de lesões mecânicas, danos biológicos, metabólicos ou químicos, e com participação também do sistema imune e de células gliais. Fármacos antineoplásicos apresentam também efeitos neurotóxicos que causam dano a neurônios sensoriais e levam ao surgimento de sintomas como alodinia e hiperalgesia a estímulos mecânicos e térmicos de duração prolongada, dificultando o tratamento de pacientes oncológicos por limitar a dose e/ou a duração adequada do tratamento e aumentando a morbidade e a mortalidade entre estes pacientes. Nos últimos 20 anos, evidências científicas apontam o papel fundamental de células imunes inatas infiltrantes e residentes, que respondem principalmente via receptores do tipo Toll, e de células da glia em resposta a danos ou à atividade aumentada de neurônios sensoriais. Dentre os quimioterápicos causadores de dor neuropática, temos o paclitaxel, capaz de se ligar diretamente ao receptor do tipo Toll 4. Assim, hipotetizamos que o tratamento com paclitaxel causa ativação direta de macrófagos presentes no gânglio da raiz dorsal e astrócitos da medula espinal, contribuindo para manutenção da dor neuropática. Para avaliar a participação de macrófagos e astrócitos no desenvolvimento e manutenção da CIPN, utilizamos abordagens in vitro e in vivo, com todos os protocolos experimentais com animais tendo sido aprovados pelo CEUA da FMRP/USP (processo nº 011/2020). Experimentos comportamentais com animais com deleção total do receptor (TLR4-/-) revelaram que a ausência do receptor impede o desenvolvimento de neuropatia após o tratamento com paclitaxel (8 mg/kg; i.p.). Utilizando culturas de células primárias (macrófagos derivados de medula óssea e astrócitos corticais) obtidos de filhotes wild-type ou TLR4-/- e posteriormente tratadas com paclitaxel (10 µM), TNFα (10 ng/ml) ou LPS (10 ng/ml), demonstramos também a supressão da resposta inflamatória por citocinas e quimiocinas na ausência do receptor. Para investigar a participação específica do receptor em células mieloides e em astrócitos, geramos duas novas linhagens de animais com deleção condicional para ambos os tipos celulares (LysMcre-TLR4flox/flox; Aldh1l1cre/ERT2-TLR4flox/flox). A realização de testes comportamentais em ambas as linhagens demonstrou que apenas nos animais com ausência de TLR4 em células mieloides houve proteção ao desenvolvimento da neuropatia. Analisando se havia diferença na quantidade de macrófagos e na expressão de TLR4 nestas células presentes no gânglio da raiz dorsal, realizamos experimentos de citometria de fluxo e de hibridização in-situ, que demonstraram, coletivamente, que o número de macrófagos aumenta nos dias subsequentes ao tratamento com paclitaxel e que a expressão de TLR4 é significativamente aumentada em macrófagos teciduais. Finalmente, para investigar um possível mecanismo de participação de macrófagos na neuropatia, utilizamos animais com deleção total de CCL2 (CCL2-/-) para testes comportamentais, apoiados pelos dados in-vitro que revelavam aumento expressivo desta quimiocina após tratamento com paclitaxel. Os testes de alodinia e hipernocicepção mecânica mostraram que a ausência da quimiocina protege contra o desenvolvimento da dor neuropática, indicando a importante participação da via CCL2/CCR2 nesta patologia. Portanto, os achados deste trabalho demonstram que a participação do receptor do tipo Toll 4 em macrófagos é fundamental para o desenvolvimento e manutenção de dor neuropática por meio da produção de citocinas e quimiocinas, especialmente CCL2.