Caracterização da proteína pequena secretada rica em cisteína (CSS) como candidato a vacina contra Plasmodium. - Gaitan, Xiomara Alexandra (2024)
A invasão de células hospedeiras por zoítos de Plasmodium é um processo complexo e envolve múltiplas proteínas e complexos proteicos que são alvos para o desenvolvimento de vacinas contra a malária. Em P. falciparum, um complexo (PCRCR) composto pelas proteínas P. falciparum thrombospondin-related apical merozoite protein (PTRAMP), cysteine-rich small secreted protein (PfCSS), PfRh5-interacting protein (PfRipr), cysteine-rich protective antigen (CyRPA) e reticulocyte binding protein homologue 5 (PfRh5), é essencial para a invasão de eritrócitos por merozoítos. Em P. knowlesi e outros plasmódios do clado não Laverania, CyRPA e Rh5 não são conservados, e um complexo trimérico (PCR) composto por PkPTRAMP, PkCSS e PkRipr foi identificado como essencial para a invasão de merozoítos. Imunoprecipitações de PbRipr de extratos de merozoítos de P. berghei identificaram PbPTRAMP e PbCSS, mostrando que o complexo também está presente em merozoítos de P. berghei. Nesta tese, usamos o modelo P. berghei de malária em camundongos para estudar o papel da PbCSS em estágios invasivos e como um potencial antígeno vacinal. Tentativas malsucedidas de nocaute da PbCSS indicaram que ela é essencial para a invasão de merozoítos e sugerem que o PCR é de fato um complexo de invasão presente em merozoítos de Plasmodium. No entanto, a vacinação de camundongos com proteínas recombinantes ou mRNA baseados na sequencia da PbCSS não os protegeu contra desafio com estágios sanguíneos de P. berghei. Da mesma forma, os anticorpos contra a CSS de P. vivax mostraram apenas uma inibição modesta da invasão de reticulócitos por P. vivax in vitro. Nos esporozoítos de P. berghei, PbPTRAMP e PbCSS são expressos, mas a PbRipr está ausente, sugerindo que o complexo PCR não é formado e levantando a questão se os esporozoítos usam essas proteínas para invasão. Confirmamos a expressão de CSS em esporozoítos de P. beghei e de P. vivax. Para estudar a função da CSS nos estágios pré-eritrocíticos, utilizamos o sistema DiCre de recombinase dependente de rapamicina para nocautear condicionalmente (cKO) a PbCSS em esporozoítos. Descobrimos que, embora os esporozoítos PbCSS-cKO apresentem invasão das glândulas salivares do mosquito e motilidade normais, eles são deficientes na invasão de hepatócitos e na infecção de camundongos. Os camundongos vacinados com mRNA baseado na sequência da PbCSS e desafiados com esporozoítos foram parcialmente protegidos, como evidenciado por um atraso de um dia na parasitemia patente. Nossos dados sugerem que a PbCSS pode ser um componente comum de diferentes complexos de invasão em merozoítos e esporozoítos, e é um alvo promissor para o desenvolvimento de vacinas que interrompam múltiplos estágios do ciclo de vida do parasita.