Análise da atividade transcricional dos promotores precoces de E6 e E7 de diferentes variantes dos HPVs 6 e 11 durante a diferenciação celular - Caodaglio, Amanda Schiersner (2025)
Os papilomavírus humanos (HPV) são um grupo de vírus que infectam epitélios mucoso e cutâneo e cujo genoma dupla fita possui uma região não codificante, responsável pela regulação da transcrição e replicação viral (LCR). O ciclo de vida do HPV está intimamente ligado ao programa de diferenciação do epitélio hospedeiro. Os mecanismos que controlam esta sincronização se devem em parte à composição variável dos sítios de ligação dos fatores de transcrição (FTs) na LCR viral e à expressão diferencial desses fatores entre as diferentes camadas de epitélio estratificado. Embora os HPVs de baixo risco oncogênico (LR-HPV) sejam considerados não carcinogênicos para humanos, as infecções por LR-HPV apresentam importantes implicações clínicas, com elevados custos para a saúde. LR-HPVs possuem três promotores precoces (P90, P270 e P680) responsáveis pela regulação diferencial dos transcritos E6, E7 e E1^E4, respectivamente, através das camadas epiteliais, indicando que a regulação independente é importante para o ciclo de vida viral. Até o momento, poucos trabalhos abordaram a expressão gênica de LR-HPV no contexto dos diferentes estágios do ciclo de vida viral. Pelo exposto, este estudo teve como objetivo investigar a atividade transcricional dos promotores precoces P90 e P270 de HPV-6 e HPV-11 durante a diferenciação celular. Para isso, construíram-se vetores recombinantes contendo as sequencências das LCRs destes vírus até os promotores P90 ou P270, os quais foram utilizados em ensaios de transfecção em células C-33A e HaCat. Inicialmente, ensaios de transfecção em larga escala com 498 fatores de transcrição (FTs) identificaram 212 FTs que impactavam a atividade transcricional de pelo menos um dos promotores precoces em ao menos um dos tipos virais estudados. Análises in silico dos sítios de ligação putativos desses fatores, aliadas à revisão da literatura, permitiram a seleção de oito fatores de transcrição para os ensaios de validação dose-dependente: MAFB, CTNNB1, FOS, FOXA1, HEY1, LMO4, SFRS2 e TP53. Nestes ensaios, MAFB apresentou tendência à repressão do promotor P90 e à ativação do P270; HEY e CTNNB1 inibiram apenas P270, enquanto TP53, LMO4 e SFRS2 inibiram ambos os promotores. FOS e FOXA1 ativaram ambos os promotores. Em ensaios de validação diferenciação-dependente realizados com MAFB, não foi possível observar diferenças nas atividades transcricionais dos promotores P90 e P270. Entretanto, foi possível observar que a atividade dos promotores tende a se intensificar nas células diferenciadas. Esses achados ampliam o conhecimento sobre a regulação transcricional dos promotores precoces de HPVs de baixo risco, evidenciando que fatores celulares específicos podem modular o ciclo de vida viral durante a diferenciação epitelial, o que poderá orientar futuras estratégias diagnósticas e terapêuticas.