Caracterização funcional de tiol-redutases lisossômicas induzidas por interferon-gama (GILT) na colonização de carrapatos e de células embrionárias de carrapatos por Rickettsia rickettsii. - Alonso, Beatriz Iglesias (2023)
Carrapatos são ectoparasitas que se alimentam obrigatoriamente de sangue, sendo vetores versáteis de diversos patógenos. Dentre as doenças transmitidas ao homem por carrapatos, a febre maculosa das Montanhas Rochosas, ocasionada pela bactéria Rickettsia rickettsii, é uma das mais letais. No Brasil, a transmissão ocorre principalmente pela picada do carrapato Amblyomma sculptum e, na região metropolitana de São Paulo, por Amblyomma aureolatum. Embora pertençam ao mesmo gênero, as duas espécies apresentam diferenças na susceptibilidade à infecção por R. rickettsii, sendo A. aureolatum mais susceptível do que A. sculptum. Nosso grupo de pesquisa determinou previamente os efeitos da infecção com R. rickettsii sobre o perfil de expressão gênica do intestino de A. sculptum e A. aureolatum. Dentre as sequências codificadoras (CDSs) de fatores do sistema imune moduladas pela infecção, duas CDSs de tiol-redutases lisossomais induzidas por interferon-gama (GILT; do inglês, gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase) foram induzidas no intestino de A. sculptum, enquanto uma foi reprimida no intestino de A. aureolatum. Esse resultado apontou as GILTs como potenciais fatores responsáveis pelas diferenças de susceptibilidade dessas duas espécies de carrapatos à infecção. Assim, o principal objetivo desse estudo foi determinar o efeito do silenciamento gênico de GILTs na aquisição de R. rickettsii por carrapatos A. sculptum e na proliferação bacteriana em linhagens de células embrionárias de Rhipicephalus microplus (BME26) e de A. sculptum (IBU/ASE-16). Para tal, experimentos de RNA de interferência (RNAi) foram conduzidos. A expressão de GILT foi significativamente menor em carrapatos e em células BME26 tratados com dsRNAs específicas para GILT do que nos grupos controle (tratados com dsRNA para a GFP; do inglês, green fluorescente protein). O silenciamento de GILT ocasionou uma diminuição significativa do número de bactérias tanto nos carrapatos quanto nas células BME26. O mesmo fenótipo foi observado nas células IBU/ASE-16; porém, o silenciamento gênico não pode ser confirmado, possivelmente devido a uma baixa expressão de GILT tanto no grupo dsGILT quando no grupo controle. Dados do nosso grupo de pesquisa e da literatura haviam sugerido uma correlação entre GILT e a via Toll, uma das principais vias de sinalização do sistema imune de artrópodes. Assim, análises da expressão gênica de GILT em órgãos e células embrionárias de carrapatos silenciados para Dorsal, o fator de transcrição da via Toll, foram realizadas. Não foi observada nenhuma diferença dos níveis de transcritos de GILT entre os grupos dsDorsal e dsGFP (controle). Os efeitos da infecção sobre o perfil de expressão gênica de GILT, Dorsal e Cactus em células BME26 também foram avaliados. Foi observado um aumento da expressão de GILT e de Cactus, inibidor da via Toll, 6 h após a infecção, enquanto a expressão de Dorsal foi reduzida 24 e 48 h após a infecção. Em conjunto, os dados obtidos pelo presente estudo indicam que GILT seja um fator facilitador da infecção de carrapatos e células de carrapatos por R. rickettsii. Ademais, a expressão gênica de GILT parecer ser independente da via Toll, a qual, por sua vez, parece ser reprimida pela infecção por R. rickettsii. A realização de estudos adicionais se faz necessária a fim de se determinar a via de sinalização do sistema imune responsável pelo controle da expressão gênica e o mecanismo de ação de GILT em carrapatos.