MicroRNA-29c-3p é regulado por concentração elevada de glicose e reduz a migração de fibroblastos dérmicos humanos em matriz de colágeno. - Santos, Douglas Amaral dos (2023)
A cicatrização deficiente de feridas é uma complicação importante do Diabetes Mellitus, contribuindo para o aparecimento de feridas crônicas de difícil resolução. Em indivíduos diabéticos, alterações funcionais em fibroblastos contribuem para a cicatrização deficiente, já que estas células proliferam, migram e se diferenciam em miofibroblastos para contrair a ferida. Além disso, os fibroblastos regulam outros tipos celulares e, na fase final da cicatrização, remodelam a matriz extracelular secretando metaloproteinases e diferentes componentes da matriz. A exposição de fibroblastos a uma concentração elevada de glicose, compatível com hiperglicemia, reduz a sua adesão e migração sobre fibronectina de forma dependente do estresse oxidativo e de microRNAs. Estes últimos são pequenos RNAs não codificantes capazes de regular a expressão gênica hibridizando-se e degradando diferentes RNAs mensageiros ou bloqueando a sua tradução. Este estudo teve como objetivos:1) avaliar os efeitos de uma elevada concentração de glicose sobre a migração de fibroblastos dérmicos humanos em matrizes bidimensionais (2-D) e tridimensionais (3-D) de colágeno tipo I; 2) avaliar os efeitos da glicose elevada sobre a expressão dos microRNAs da família 29 (miR-29a-3p, miR-29b-3p e miR-29c-3p), potenciais reguladores de diversos tipos de colágenos e da adesão celular, assim como as consequências funcionais dessa modulação. Para isso, fibroblastos HFF foram cultivados sob baixa concentração de glicose (5 mM) ou elevada concentração de glicose (30 mM) por 7 dias. A expressão de miR-29a, miR-29b e miR-29c foi avaliada por RT-PCR em tempo real. Foram realizados ensaios de migração direcional por estímulo quimiotático em câmaras bipartite e de migração espontânea em matrizes 2-D e 3-D de colágeno I, utilizando um sistema de time-lapse. Ensaios funcionais foram realizados após superexpressão e supressão de miR-29c utilizando transfecção com oligonucleotídeos miméticos mimics-miR ou inibidores anti-miR. A expressão proteica de integrina 1 foi avaliada por western blotting. A concentração elevada de glicose reduziu a migração celular direcional estimulada por quimiotaxia. Na migração espontânea, em ambientes 2-D e 3-D, a velocidade e direcionalidade celulares não foram alteradas. A expressão de miR-29c foi aumentada em 50% pela glicose, sem alterar a expressão de miR-29a e miR-29b. O miR-29c reduziu a migração direcional de fibroblastos em 40% na presença de estímulos quimiotáticos. Na migração espontânea, tanto em ambientes 2-D quanto em 3-D, a velocidade e direcionalidade celulares foram reduzidas pelo miR-29c, acompanhadas de um aumento da adesão celular ao colágeno I e redução da expressão proteica da subunidade β1 de integrinas, alvo potencial de miR-29c. Concluímos que a glicose elevada aumenta a expressão de miR-29c em fibroblastos humanos, contribuindo para a migração deficiente, potencialmente por meio de seu alvo direto integrina β1. Este efeito pode contribuir para a cicatrização deficiente de feridas observada em pacientes diabéticos.