Identificação e caracterização parcial de fração ligante de quitina da preparação paracoccina de Paracoccidioides brasiliensis - Alegre, Ana Claudia Paiva (2010)
Paracoccidioides brasiliensis é o agente causador da micose granulomatosa crônica mais prevalente na América do Sul, com alta incidência no Brasil. O fracionamento do extrato bruto de P. brasiliensis, chamado de preparação paracoccina, foi isolado por afinidades a N-acetilglicosamina e quitina. A preparação paracoccina possui componente(s) que contribui(em) para a adesão do fungo a matriz extracelular, e induz macrófagos a produzirem TNF-α e altas concentrações de NO. A partir da tecnologia IgY, descrita neste trabalho, tornou-se possível a produção de grandes quantidades de anticorpos policlonais contra a preparação paracoccina (PCN-prep), que viabilizaram os ensaios de rastreamento da biblioteca de cDNA de leveduras de P. brasiliensis. Alguns genes identificados continham sequência de tradução de proteínas já descritas para o isolado Pb18, como o gene PADG_02130.1, correspondente a uma ciclohidrolase. Um dado importante foi a aplicação de técnicas de proteômica para identificar componentes da preparação paracoccina, que destacou o gene que codifica uma proteína hipotética de P. brasiliensis, anotado como PADG_03347. A proteína resultante desse gene apresenta sequência polipeptídica com alta homologia a proteínas compostas por domínios plurais distintos, sendo um ligante de quitina e outro com atividade quitinolítica. O maior éxon do gene PADG_03347 foi clonado em sistema bacteriano para a expressão de molécula recombinante, que corresponde a mais de 80% da sequência polipeptídica predita para a molécula nativa. O fragmento recombinante foi reconhecido pelos anticorpos IgY anti-PCN-prep, reforçando a idéia de que a proteína expressa por PADG_03347 deve estar presente na PCN-prep. Adicionalmente, anticorpos presentes no soro de pacientes com paracoccidioidomicose, que reagiram fortemente com diversas frações em PCN-prep, reagiram também com a fração recombinante. Esse fragmento recombinante foi caracterizado por possuir certa atividade de N-acetil-β-D-glicosaminidase, menor quando na comparação com o material purificado em coluna de quitina. Por outro lado, a atividade lectínica parece preservada na molécula recombinante, e essa atividade pode estar relacionada com a capacidade de induzir as produções de NO e TNF-alfa por macrófagos peritoneais, confirmadas nesse trabalho. Assim, os estudos de caracterização da molécula recombinante trouxeram informações importantes que devem guiar estudos futuros mais abrangentes com essa molécula.