Análise fosfoproteômica do fungo Trichoderma reesei durante a degradação do bagaço de cana de açúcar - Pedersoli, Wellington Ramos (2018)
Trichoderma reesei é o principal produtor de celulases e hemicelulases. Entretanto, a regulação da expressão dessas enzimas não é totalmente compreendida. Sabe-se que os eventos de fosforilação estão envolvidos na regulação de vários processos, incluindo metabolismo, transcrição, regulação da tradução, degradação de proteínas, homeostase, sinalização e secreção proteica, entre outros. Em T. reesei, o padrão de fosforilação da proteína muda de maneira dependente da fonte de carbono. Para compreender os eventos de fosforilação e como este processo afeta diferentes funções celulares em T. reesei em presença de bagaço de cana-de-açúcar, a principal biomassa para produção de bioetanol no Brasil, realizamos um experimento no qual identificamos proteínas fosforiladas por LC-MS / MS. Um total de 114 proteínas fosforiladas foram identificadas. Fosfosserina e fosfotreonina (ST) corresponderam a 89,6% dos fosfitoses e 10,4% relativos à fosfotirosina (Y). Entre as proteínas identificadas, 65% são fosforiladas isoladamente, 19% são duplamente fosforiladas, 12% são triplamente fosforiladas e 4% são fosforiladas, incluindo um peptídeo que apresentou 11 fosfopeptídeos. Após a aplicação dos critérios de filtragem NetworKIN (Score String ≥0,6 e Escore NetworKIN ≥1,0), 75 kinases foram preditas para fosforilar os locais identificados neste trabalho, compreendendo 19 famílias de serina / treonina quinase para todos os locais de fosforilação identificados. As famílias de serina / treonina quinase mais frequentes foram PKC1. Entre as proteínas fosforiladas, quatro hidrolases glicosiladas eram conhecidas por serem secretadas (uma glucuronidase, uma beta-xilosidase, uma exo-glucanase e uma celobiohidrolase - CBHI). O CBHI foi purificado a partir do secretoma de T. reesei e desfosforilado para detectar qualquer diferença de atividade enzimática causada pela fosforilação. A atividade da CBHI foi cerca de 60% menor após a desfosforilação. O padrão de fosforilação ampla que ocorre em T. reesei quando cultivado em bagaço de cana-de-açúcar fornece novas informações sobre várias proteínas não descritos anteriormente. Este trabalho mostra pela primeira vez que as glicosil-hidrolases secretadas são fosforiladas na condição testada. Nossos resultados sugerem que a atividade da CBHI é modulada pela fosforilação.