Efeitos epigenéticos de uma dieta com alto teor calórico e lipídico e da suplementação de micronutrientes em animais com lúpus - Ribeiro, Amanda Alves (2024)
Introdução: O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma condição complexa associada a uma desregulação imune, cuja fisiopatologia resulta da interação entre fatores genéticos, epigenéticos e ambientais, incluindo dieta. Assim, padrões de metilação do DNA vem emergindo como um elemento crucial no desenvolvimento da autoimunidade, progressão da doença e resposta aos tratamentos. Ainda, obesidade representa um risco adicional de complicações e piora no estado inflamatório e na gravidade do LES, provavelmente devido ao aumento da secreção de adipocinas inflamatórias. Objetivo: Este estudo exploratório teve como objetivo avaliar o perfil de metilação do DNA e a expressão dos genes Dnmt1, Il-6, TNF-alfa, Stat3 e Lep no tecido adiposo de um modelo animal de LES alimentado com ração padrão ou com alto teor calórico e lipídico; além de investigar os efeitos da suplementação com ácido fólico e vitamina B12 nessas variáveis. Materiais e Métodos: Trinta camundongos fêmeas da linhagem NZBWF1/J foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos de acordo com a ração a ser recebida durante 12 semanas do protocolo experimental: 1. Grupo Ração Padrão (SD, n = 7) que recebeu ração regular (4,2 kcal/g), 2. Grupo Obesidade (HFD, n = 7) que recebeu ração hipercalórica e hiperlipídica (6,6 kcal/g); 3. Grupo Ração Padrão Suplementada (SDS, n = 8) que recebeu ração regular suplementada e 4. Grupo Obesidade Suplementado (HFDS, n = 8) que recebeu ração hiperlipídica e hipercalórica suplementada. A suplementação consistiu em 8 mg de ácido fólico e 50 g de vitamina B12 por kg de ração. Após as 12 semanas, foram coletadas amostras de tecido adiposo para extração de DNA e RNA, utilizando kits comerciais específicos. A análise de metilação do DNA foi realizada utilizando o ensaio Infinium Mouse Methylation BeadChip, enquanto a expressão gênica foi avaliada por reação em cadeia de polimerase. As mudanças () no nível de metilação de cada CpGs foram calculadas considerando com valor mínimo de 5%, p<0,001 e taxa de falsa descoberta <0,05. Resultados: Observou-se que os animais do grupo HFD ganharam o dobro do peso daqueles do grupo SD (14,5±1,6 g vs. 7,5±2,7g, p< 0,05); no entanto, não houve diferenças significativas do peso entre os grupos SDS vs. SD e HFDS vs. HFD. Foram identificados 193 sítios CpGs diferentemente metilados (DMCpGs) entre os grupos SD e HFD, associados a genes das vias de sinalização de insulina e migração transendotelial de leucócitos. Entre os grupos SD e SDS, foram encontrados 79 DMCpGs relacionados a genes da via de regulação da lipólise em adipócitos e interação citocina-receptor de citocina. A comparação entre os grupos HFD e HFDS revelou 356 DMCpGs relacionados a genes das vias de sinalização da insulina e detecção de DNA citosólico. Destaca-se que a expressão de TNF-alfa e Stat3 foi inferior nos grupos suplementados em comparação com aqueles não suplementados. Conclusão: Animais alimentados com ração hipercalórica e hiperlipídica apresentaram diferente perfil de metilação do DNA e expressão gênica do que aqueles alimentados com ração padrão, ressaltando a hipometilação de genes associados à inflamação e resistência à insulina. O perfil de metilação do DNA e a expressão dos genes alvos foi diferente entre animais alimentados com ração suplementada daqueles que receberam a ração padrão, modulando genes envolvidos na cascata de inflamação e autoimunidade