Avaliação imune e parasitológica da infecção experimental múltipla por promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum em camundongos BALB/c wild type e knockout de IFN-Î³ - Freitas, Flavia Regina Novais de (2023)
As leishmanioses são um grupo de doenças tropicais causadas por protozoários do gênero Leishmania sp.. A LV (LV) é a forma mais severa, podendo ser fatal se não tratada. A LV afeta principalmente crianças, adultos acima de 50 anos, pessoas com comorbidades ou imunossuprimidas. A maioria dos casos de LV ocorre no Brasil, leste da África e Índia. A transmissão é feita por flebotomíneos, com os cães atuando como fontes principais de infecção para esses vetores. Muitos infectados não apresentam sintomas, indicando uma resposta imune eficaz. Esse estudo busca entender como a resposta imune eficaz funciona em pacientes assintomáticos com LV. Isso é importante para desenvolver vacinas e tratamentos eficazes. O objetivo deste estudo é investigar o impacto das múltiplas infecções na carga parasitária em camundongos. Para tal, avaliamos como diferentes quantidades de inóculos de promastigotas de Leishmania (Leishmania) infantum influenciam na infecção experimental. Inicialmente, padronizamos o modelo utilizando camundongos BALB/c do tipo selvagem (wildtype, WT). Os animais foram distribuídos aleatoriamente em três grupos, denominados respectivamente como Grupo Controle, Grupo G1 e Grupo G2. Os animais do Grupo Controle permaneceram sem qualquer infecção, enquanto os do Grupo G1 foram submetidos a uma única inoculação contendo 1x107 promastigotas de L. (L) infantum. Por sua vez, os animais do Grupo G2 foram submetidos a quatro inoculações semelhantes. Posteriormente, para análise e comparação entre os grupos, o tamanho amostral foi aumentado. Além disso, para investigar o papel do interferon-gama (IFN-), camundongos knockout para esse gene (GKO) foram incluídos no estudo e distribuídos em grupos semelhantes aos do modelo WT. Após 30 dias da infecção, os animais foram eutanasiados e amostras biológicas (sangue da cauda, sangue total, baço, fígado) foram coletadas. Usamos PCR em tempo real para medir a densidade parasitária (parasitas/mg de proteínas) nos órgãos. Realizamos ensaios sorológicos, incluindo ELISA convencional (ELISAc) para anticorpos IgG anti-Leishmania, e ELISA dissociativo (ELISAd) para imunocomplexos circulantes (CIC). Utilizamos citometria de fluxo para analisar linfócitos. Também examinamos tecidos por microscopia corada com hematoxilina e eosina. Foi observado que uma única dose de promastigotas de L. (L) infantum é mais eficaz para induzir infecção no fígado e baço em comparação com múltiplas doses. Isso resultou em menor produção de anticorpos específicos e não foi influenciado pelo IFN-. O estudo também estabeleceu uma medida de densidade parasitária nos órgãos, permitindo quantificar a infecção por L. (L) infantum nos camundongos BALB/c. Com inóculos semanais repetidos, observou-se menor infecção nos tecidos, aumento da produção de anticorpos e aumento das células produtoras de anticorpos nos camundongos. A ausência IFN- não afetou a infecção única nem os efeitos de múltiplos inóculos no modelo experimental, conforme comparado com os resultados obtidos em animais selvagens. Os resultados do estudo podem ajudar a compreender melhor a transmissão da doença e contribuir para estratégias de controle mais eficazes. Além disso, esses resultados fornecerão insights sobre a imunopatologia da doença em modelos animais e caninos