Screening de pequenas moléculas potenciais inibidoras da p38δ MAPK como estratégia para a busca de um novo tratamento para câncer de mama

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Anton, Débora Bublitz
• Orientador(a): Goettert, Márcia Inês
• Banca de defesa: Bustamante Filho, Ivan Cunha, Ducati, Rodrigo Gay, Morrone, Fernanda Bueno
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Programa de Pós-Graduação: PPGBiotec;Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Câncer de mama; p38δ MAPK; Pequenas moléculas; Hipericina; Breast cancer; Small molecules; Hypericin
• Área do conhecimento CNPq: CB
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10737/2936

O câncer de mama é a neoplasia mais frequente entre as mulheres e a principal causa de morte relacionada ao câncer nas mulheres do mundo todo. Os principais tratamentos para essa doença, como a quimioterapia, radioterapia e cirurgia, podem apresentar diversos efeitos colaterais e não serem eficazes em estágios avançados da doença quando existem altas chances de metástase. Pequenas moléculas que atuam em alvos específicos de vias de sinalização que podem estar desreguladas no câncer como, por exemplo, a via p38 MAPK, estão sendo estudadas para a terapêutica antineoplásica e são alvos promissores para o desenvolvimento de novos fármacos mais seletivos. Visto que no câncer de mama o aumento da expressão da isoforma p38δ está relacionado com progressão do tumor e metástases, e visando a carência de inibidores específicos de p38δ, este estudo teve como primeiro objetivo identificar, por meio de um screening virtual, pequenas moléculas com potencial de inibir p38δ. Posteriormente, o objetivo foi avaliar o potencial antitumoral da molécula selecionada na linhagem de adenocarcinoma de mama humano MCF-7. As estruturas 3D da p38δ na sua forma ativa (DFG-in) e inativa (DFG-out) foram selecionadas do banco de dados PDB. Candidatos a ligantes foram selecionados após revisão na literatura e suas estruturas foram obtidas do banco de dados PubChem. O screening virtual indicou a Hipericina como a molécula de maior afinidade pela p38δ ativa, sendo assim, um candidato a inibidor da enzima p38δ. A viabilidade e proliferação de células MCF-7 foram determinadas após diferentes tratamentos com Hipericina por 24, 48 e 72 horas, através do ensaio de MTT e clonogênico, respectivamente. Entretanto, nesses ensaios a Hipericina não demonstrou ter atividade antitumoral na MCF-7. Visto que a Hipericina não apresentou a citotoxicidade esperada, a molécula PIT97 foi escolhida para ser estudada quanto ao seu potencial antitumoral in vitro e como uma possível molécula candidata ao tratamento do câncer de mama. As linhagens MCF-7 e de macrófagos murino RAW 264.7 foram tratadas com diferentes concentrações do PIT97 e a viabilidade celular foi avaliada após 48 e 72 horas, através do ensaio de MTT. A proliferação de células MCF-7 tratadas com PIT97 por 72 horas foi avaliada pelo ensaio clonogênico. Os resultados obtidos demonstraram redução da viabilidade da MCF-7 após o tratamento com o PIT97 por 48 e 72 horas, enquanto que na linhagem RAW 264.7 baixas concentrações da molécula (0,1 μM e 0,01 μM) não foram tóxicas. Além disso, foi demonstrado que o PIT97 não só atua a curto prazo na linhagem MCF-7, mas continua tendo efeitos citotóxicos a longo prazo. Desta forma, a molécula PIT97 possui potencial como molécula candidata e como alternativa terapêutica mais seletiva para o câncer de mama. Consequentemente, estudos serão realizados visando elucidar e compreender o mecanismo pelo qual a molécula exerce seu efeito.