Obtenção da proteína codificada pelo gene rv3429 de Mycobacterium tuberculosis e avaliação da reatividade imune humoral

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Mulinari, Ana Carla de Paulo
• Orientador(a): Saad, Maria Helena Feres, Sardella, Isabella Gama
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/22982
• topic: MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS; TESTES IMUNOLÓGICOS; PROLINA

Introdução: A demora no diagnóstico da tuberculose (TB) é um importante fator para a manutenção desta endemia. Estudos recentes têm demonstrado que a família de proteínas PE/PPE tem importante papel na patogênese, virulência e evasão de M. tuberculosis, agente etiológico da TB, durante a infecção e, essas duas famílias, são também responsáveis por induzir resposta imune humoral e celular. O gene rv3429 codifica a proteína PPE59, que ainda não foi explorada quanto a sua capacidade de ser reconhecida por anticorpos do soro de pacientes com TB. Assim, este estudo tem por objetivos expressar a proteína PPE59 e avaliar sua imunorreatividade em populações de áreas geográficas diferentes. Metodologia: O sistema de expressão gênica foi o heterólogo Escherichia coli (Dh5\03B1). A avaliação da imunorreatividade foi realizada por técnica de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) para IgA e IgG em pacientes com TB pulmonar provenientes do Brasil (TBpulBR), bem como em pacientes com TB pulmonar (TBpulIT) e extrapulmonar (TBExpIT) imigrados na Itália. Resultados: PPE59 foi expressa com sucesso e sem a presença de corpos de inclusão, que favorece melhor rendimento e estabilidade da proteína expressa. Foram utilizados neste estudo, 202 indivíduos. 123 brasileiros e 79 imigrantes na Itália. Os resultados do ELISA, expressos em medianas, foram mais elevados entre os brasileiros, do que entre os imigrantes, porém com diferença significativa apenas para IgG, quando foram comparadas as diferentes áreas geográficas análise de reatividade demonstrou ser a IgA mais sensível (53 % e 38 %) do que a IgG (26 % e 4 %) para a população do Brasil e Itália, respectivamente, e mais específica para as Ig (97 % e 86 %), respectivamente. O grupo TBExpIT, mostrou as menores sensibilidades (IgA: 28% e IgG: 0%). A análise bi e multivariada associou a positividade de IgA em TBpulBR com alcoolismo, imagem de Raio-X de tórax com alta probabilidade de TB e o sexo masculino (p<0,04). Conclusões: Foi possível estabelecer um protocolo de expressão heteróloga para a proteína PPE59 sem a presença de corpos de inclusão. PPE59 mostrou imunodominância para IgA. Devido à alta especificidade da PPE59 sua combinação com outros antígenos específicos pode levar a um imunoteste de maior sensibilidade