Otimização, Padronização, Validação e Avaliação Comparativa de Testes de Quantificação dos Anticorpos Neutralizantes para o Vírus da Febre Amarela

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Simões, Marisol
• Orientador(a): Camacho, Luiz Antonio Bastos, Lima, Sheila Maria Barbosa de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/29295
• topic: Febre Amarela; Testes de Neutralização; Anticorpos Neutralizantes; Estudos de Validação

A febre amarela (FA) é uma doença infecciosa aguda, febril, causada pelo vírus protótipo do gênero Flavivirus. A doença permanece como grande problema de saúde pública, principalmente em regiões endêmicas da África e América do Sul. No Brasil, ondas alarmantes de epizootias e epidemias são registradas desde 2016. A vacinação é a maneira mais eficaz de prevenção e controle da FA. As vacinas disponíveis produzidas com as subcepas 17D-204 e 17DD são seguras e imunogênicas, induzindo a formação de anticorpos neutralizantes que aparecem precocemente, são protetores e de longa duração. Apesar de ser considerado referência para a análise da resposta imune protetora após a vacinação, a metodologia clássica do teste de neutralização por redução de placas de lise (PRNT) é trabalhoso, de difícil execução, requer recursos humanos, equipamentos e insumos específicos, além de um tempo longo para a sua finalização, mesmo na versão micro PRNT (em placas de 96 poços). Esta adaptação do método é mais operacional do que o PRNT (em placas de 6 poços), com maior capacidade de processamento das amostras. Mas, além das desvantagens semelhantes ao teste referência, apresenta a dificuldade de leitura das placas de lise por ser realizado em poços menores. A busca por um teste mais rápido, semiautomatizado e eficiente para a quantificação de anticorpos neutralizantes vem ao encontro das necessidades de aumento da capacidade e melhoria de análises das amostras de estudos clínicos O presente estudo objetivou não somente otimizar a metodologia já utilizada na rotina do Laboratório de Tecnologia Virológica para os estudos de avaliação de imunogenicidade das vacinas para FA (micro PRNT), mas também padronizar uma metodologia mais rápida e semiautomatizada denominada \03BCPRN-HRP. A partir da definição dos protocolos de execução, ambas as metodologias foram validadas com os parâmetros de precisão, exatidão, seletividade e robustez. Posteriormente à validação, 200 soros de indivíduos vacinados foram processados pelas três metodologias para a avaliação da concordância (Coeficiente de Correlação Intraclasse, CCI) dos testes índices (micro PRNT e \03BCPRN-HRP) com o teste referência (PRNT). Os critérios de análise predefinidos para todos os ensaios de validação foram alcançados pelas metodologias em placas de 96 poços. O micro PRNT apresentou concordância moderada a substancial com o PRNT tanto para os títulos em log10 da recíproca da diluição (CCI de 0,59 e 0,74) quanto para os títulos em log10 de mUI/mL (CCI de 0,48 e 0,65). O \03BCPRN-HRP apresentou concordância de fraca a moderada com o PRNT para os títulos em log10 da recíproca da diluição (CCI de 0,29 e 0,45). Mas, para os títulos em log10 mUI/mL, os estimadores de concordância apresentaram magnitude substancial a quase completa com o PRNT (CCI de 0,69 e 0,82). Os coeficientes de correlação linear obtidos para os testes índices foram muito próximos, sugerindo correlação moderada (r > 0,70) com o teste referência para os títulos em recíproca da diluição e em mUI/mL. Portanto, tanto o micro PRNT quanto o \03BCPRN-HRP podem ser utilizados na avaliação das vacinas para FA, gerando resultados confiáveis. O \03BCPRN-HRP destaca-se por ser um teste mais rápido, semiautomatizado e com maior capacidade de processamento de amostras.