Cultura de calos e suspensão celular de Duroia saccifera: estudo fitoquímico, cinética de crescimento e avaliação das atividades biológicas

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Sousa, Aline Bastos Brilhante de
• Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/3904113436797050
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Amazonas; Instituto de Ciências Biológicas; Brasil; UFAM; Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Palavras-chave em Português: Cultura de células; Tecidos vegetais - Cultura e meios de cultura; CIÊNCIAS BIOLÓGICAS; CIÊNCIAS EXATAS E DA TERRA: QUÍMICA: QUÍMICA ORGÂNICA: QUÍMICA DOS PRODUTOS NATURAIS; Cultura de tecidos de plantas; Metabólitos secundários; Biotecnologia; Rubiaceae
• Link de acesso: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7575

A cultura de tecidos e células vegetais é uma estratégia eficiente para a produção segura e contínua de metabólitos secundários em condições físicas e químicas controladas. A Duroia saccifera (Roem. & Schult.) K. Schum, assim como outras espécies do gênero e da família Rubiaceae, é alvo potencial para estudos fitoquímicos e farmacológicos devido à ocorrência de uma grande variedade de classes de moléculas biologicamente ativas. Com base nisso, esse trabalho teve como objetivo avaliar o potencial de crescimento, a partir da determinação das curvas de crescimento, de culturas de calos e de suspensões celulares de D. saccifera, e realizar o estudo da composição química dos extratos obtidos dos calos e suspensões, bem como avaliar as atividades químicas e biológicas. Para isso, calos previamente estabelecidos in vitro em meio Murashige e Skoog suplementado com 4 mg.L-1 de ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4D) e 2 mg.L-1 de cinetina (KIN) foram multiplicados em sucessivos subcultivos a cada 30 dias e mantidos em sala de crescimento com temperatura controlada de 26 ± 2 ºC, sob fotoperíodo de 16/8 horas (claro/escuro), providos por lâmpadas fluorescentes. O material foi extraído com os solventes orgânicos hexano, acetato de etila (AcOEt) e metanol. Os extratos foram testados nos ensaios antioxidante, antimicrobiano e antimicobacteriano, e fracionados. As culturas em suspensão celular foram estabelecidas a partir de 1 g de calos inoculados em 100 mL de meio de cultura líquido, em agitação contínua. Foram determinadas as curvas de crescimento de ambas as formas de cultivo, ao longo de 40 dias, com intuito de realizar um estudo comparativo através do cálculo dos parâmetros da cinética de crescimento. No estudo fitoquímico dos extratos foi possível verificar a presença de terpenoides, esteroides, substâncias aromáticas, ácidos graxos, entre outros metabólitos secundários. Na fração 2 (6,3 mg) do extrato hexânico foi observado o indício da presença do esteroide lupen-3-ona. Com relação aos ensaios biológicos e químicos, o extrato AcOEt apresentou alta atividade antimicobacteriana frente a Mycobacterium tuberculosis, com uma concentração inibitória mínima (CIM) de 25 μg.mL-1, uma concentração inibitória a 90% (IC90) de 19,5 μg.mL-1 e uma concentração bactericida mínima (CBM) de 200 μg.mL-1. Os extratos não foram ativos nos ensaios antimicrobianos frente às bactérias testadas, assim como os extratos não apresentaram potencial antioxidante frente ao radical livre DPPH e o complexo Fe3+/fenantrolina. Os resultados obtidos demonstraram que o calo seguiu um padrão de crescimento lento, atingindo maior massa fresca (MF) e seca (MS) no 40º dia de cultivo com concentração de 72,6 e 2,808 g.L-1, respectivamente. Já para a suspensão celular, o acúmulo de biomassa e o crescimento da cultura de células foi expressivamente maior e mais rápido, atingindo maior MF e MS no 36º dia de cultivo, sendo de 413,7 e 12,995 g.L-1, respectivamente. Não foi possível determinar com exatidão as fases estacionárias dos cultivos celulares, no entanto, foi inferido que a produção máxima de metabólitos secundários ocorreu no 40º dia para as culturas de calos e entre o 24º ao 36º dia para as culturas em suspensão. Os parâmetros cinéticos calculados demonstram que a suspensão celular possui um elevado potencial para o fornecimento de biomassa vegetal da espécie, tornando-se uma fonte promissora para a produção de metabólitos secundários obtidos in vitro.