AVALIAÇÃO DO CRESCIMENTO BACTERIANO POR CITOMETRIA DE FLUXO E PRODUÇÃO DE ANTÍGENOS SECRETADOS DE DIFERENTES CEPAS DE Corynebacterium pseudotuberculosis

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Andrade, Caio Lopes Borges
• Orientador(a): Freire, Songeli Menezes
• Banca de defesa: Cerqueira, Robson Bahia , Vale, Vera Lucia Costa , Freire, Songeli Menezes
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal da Bahia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Biotecnologia (PPGBiotec)
• Departamento: Instituto de Ciências da Saúde - ICS
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Corynebacterium pseudotuberculosis; Contagem Bacteriana; Sororreatividade Humana
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
• Link de acesso: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/37267

Introdução: Corynebacterium pseudotuberculosis responsável pela Linfadenite Caseosa (LC), doença infecto-contagiosa, de caráter crônico, que geralmente acomete pequenos ruminantes comprometendo a economia dos pequenos produtores e das regiões que contam com o agronegócio. A infecção em humano ocorre pelo manejo de animais, consumo de seus derivados crus ou em laboratórios, com poucos casos descritos e apenas um estudo no Brasil. O diagnóstico animal é relativamente simples, mas de humanos apresenta complicações. O cultivo bacteriológico proveniente do conteúdo caseoso, seguido por testes bioquímicos constitui atualmente o teste padrão ouro. Objetivo: O presente trabalho se propõe a avaliar e comparar o crescimento bacteriano e a produção de antígenos para avaliação da sororreatividade humana de três cepas de Corynebacterium pseudotuberculosis. Métodos: Para contagem bacteriana e estudo da viabilidade celular em FACSCalibur (BD) foram realizados cultivos da cepa VD57 para os três tempos (24, 48, 72 horas) e comparação com cepas CAP3W(21) e CAPJ4(76) em 24 e 48 horas. Para produção do antígeno, foi utilizado o sobrenadante do cultivo com 48 horas das cepas VD57, CAP3W(21) e CAPJ4(76), semi-purificados por técnica de partição em três fases (TPP). Foi produzido extrato em meio com e sem Tween somente para cepa CAPJ4(76). O perfil eletroforético dos quatro extratos foi analisado por SDS-PAGE em gel 12% e a sororreatividade avaliada em Western Blot com pool de amostras séricas do grupo Não Contactante (composto por 4 participantes sem histórico de contato com a bactéria ou consumo de carne crua ou mal cozida), grupo Contactante laboratório (composto por 4 indivíduos com histórico de contato por atividade em laboratório de microbiologia) e grupo Contactante fazenda (composto por 4 indivíduos com histórico de contato com animais infectados). Resultado: Na avaliação por FACs, evidenciou-se crescimento celular mais acelerado para cepa VD57 com resultado 10 vezes superior ao registrado por CAP3W(21) e CAPJ4(76). O ápice da viabilidade celular registrado foi de 48 horas, porém não foi identificada variação considerável da mortalidade celular com 72 horas. O perfil eletroforético dos extratos produzidos revelou diferenças na expressão de proteínas entre as três cepas, bem como para cultivos em condições diferentes para CAPJ4(76). Foi registrada intensa sororreatividade humana aos quatro extratos, confirmando a presença de proteínas antigênicas em todas as cepas, porém foi possível identificar diferença no perfil de reconhecimento entre os grupos Contactantes e Não Contactantes apenas no extrato VD57. Conclusão: A cepa VD57 apresenta ápice do crescimento e viabilidade no tempo de 48 horas de cultivo e na comparação entre as três cepas, demonstra crescimento e viabilidade superiores ao das demais. O perfil eletroforético dos extratos de cepas de Corynebacterium pseudotuberculosis cultivadas sob mesmas condições, apresentam similaridade no número de bandas e diferença no peso molecular. A utilização de Tween-80 no meio de cultivo, gera um acréscimo de 50% no número de bandas para CAPJ4(76). Todos os extratos produzidos apresentam antigenicidade para soro humano, porém é possível evidenciar diferença no perfil de Contactantes do perfil de Não Contactantes apenas em VD57.