Composição do veneno de Loxosceles laeta peruana revelada por análise transcriptômica NGS e desenvolvimento da ferramenta computacional PepLess

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Raissa Medina Santos
• Orientador(a): Carlos Delfin Chavez Olortegui
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Genética
• Departamento: ICB - INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOLOGICAS
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Peptideos; Spot synthesis; Bioinformatica; Loxosceles; Micrurus
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/45880

Acidentes envolvendo aranhas do gênero Loxosceles são responsáveis por emergências médicas em vários países da América do Sul. A espécie Loxosceles laeta está presente principalmente no Brasil e Peru, e é responsável por um número expressivo de acidentes nestes países. Para otimizar a caracterização dos componentes do veneno de L. laeta e revelar possíveis variações deste, fornecemos uma visão geral das toxinas presentes na glândula de veneno de L. laeta peruana, usando uma biblioteca de cDNA sequenciada por MiSeq (Illumina), e comparamos os dados obtidos com o transcriptoma baseado em Expressed Sequence Tags (EST) de glândulas de veneno de L. laeta brasileira de Fernandes-Pedrosa, 2008. A técnica de SPOT consiste na síntese de peptídeos em uma membrana de celulose e é uma ferramenta simples e de baixo custo para aplicações biotecnológicas e estudos de grande número de dados, como é o caso da análise transcriptômica de L. laeta. Apesar disso, esta técnica torna-se exaustiva quando uma grande quantidade de sequências com diferentes especificações é utilizada, devido ao extenso tempo gasto para produção das membranas e a análises manuais dos imunoensaios, além do gasto excessivo de materiais e reagentes. Por estes motivos, desenvolveu-se a ferramenta PepLess, um sistema inovador capaz de selecionar e analisar um grande número de sequências simultaneamente, permitindo uma redução considerável na quantidade de membranas produzidas. Com este sistema, é possível a elaboração de membranas com qualidade e especificidade e automaticamente analisar os resultados obtidos nos imunoensaios. Desta forma, todas as técnicas que anteriormente seriam realizadas de forma manual para a produção e utilização de membranas para SPOT synthesis poderão ser automáticas, rápidas e fáceis, permitindo a geração de resultados com melhor eficácia e qualidade e transformando esta técnica em uma poderosa ferramenta para análises complexas. Para comprovar a eficiência e eficácia da ferramenta, utilizou-se dois estudos de caso: A análise completa do transcriptoma de aranhas Loxosceles laeta de origem peruana e a produção de membrana de SPOT com os transcritos das principais serpentes do gênero Micrurus presentes na América do Sul.