Estudo da cinética da translocação do fator de crescimento epidermal (EGF) para o núcleo e da sua localização subnuclear em células-tronco mesenquimais e em células tumorais da linhagem SK-HEP-1

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Camila Cristina Fraga Faraco
• Orientador(a): Dawidson Assis Gomes
• Banca de defesa: Erich Birelli Tahara, Gregory Thomas Kitten
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Bioquímica e Imunologia
• Departamento: ICB - DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMICA E IMUNOLOGIA
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Fator de crescimento epidermal; Cinética; Translocação; Núcleo; Retículo nucleoplasmático
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/32000

O fator de crescimento epidermal (EGF) ativa, por interação com seu receptor (EGFR), vias de sinalização celulares importantes como: proliferação, migração, diferenciação e tumorigênese. Esse receptor pode ser encontrado no núcleo, onde exerce funções relacionadas à síntese e reparo de DNA, à regulação transcricional e a processos oncológicos. A presença de EGFR no núcleo tem sido associada a um pior prognóstico em pacientes com câncer e ao desenvolvimento de resistência aos tratamentos. Modelos que caracterizam a translocação do receptor estimulado por ligante para o núcleo foram estabelecidos. No entanto, a cinética dessa translocação e a sua comparação entre diferentes tipos celulares tem sido pouco estudada. Os componentes nucleares envolvidos nesse tráfego também foram pouco explorados. Diante disso, avaliamos a cinética de translocação do EGF para o núcleo em célulastronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo humano (hASC) e em células tumorais SK-HEP-1, linhagem com características mesenquimais. Células estimuladas por 5, 10, 20 e 40 minutos com EGF conjugado a Alexa Fluor® 488 foram analisadas por microscopia de superresolução, e imagens de seções ópticas em série foram adquiridas para a quantificação do número e do volume de clusters (aglomerados) de EGF no núcleo em cada tempo. Foi observado que a cinética de translocação difere entre os dois tipos celulares, uma vez que as hASC aparentam atingir equilíbrio de translocação em 10 minutos de estímulo, enquanto nas SK-HEP-1 a translocação continua ocorrendo em tempos posteriores. Verificamos que os clusters de EGF parecem se aglomerar no núcleo com o aumento do tempo de estímulo, o que sugere localizações subnucleares específicas para esse seu receptor. Ao analisarmos a presença de EGF em duas organelas nucleares, o retículo nucleoplasmático e o nucléolo, observamos que alguns clusters se localizam em ambas. Essa análise sugere que o retículo nucleoplasmático esteja envolvido no mecanismo de translocação de EGFR para o núcleo e que este receptor desempenhe funções específicas no nucléolo. Outros clusters se encontram distribuídos difusamente no nucleoplasma, o que sugere que o EGFR possa estar em outras organelas nucleares. Os resultados indicam que o estudo da translocação do EGF e de sua localização subnuclear em diferentes células pode contribuir para desvendar mecanismos associados às funções que seu receptor ativado desempenham no núcleo.