Efeito da adição de lectinas recombinantes de Bauhinia forficata sobre o estresse oxidativo na maturação in vitro de oócitos bovinos

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Borges, Morgana Alves
• Orientador(a): Collares, Tiago Veiras
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Pelotas
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
• Departamento: Centro de Desenvolvimento Tecnológico
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Toxicologia reprodutiva; Screening; Proteínas; Óxido Nítrico; Reproductive toxicology; Proteins; Nitric Oxide
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
• Link de acesso: http://guaiaca.ufpel.edu.br/handle/prefix/8850

A semelhança em vários aspectos da foliculogênese com fêmeas monovulatórias torna a maturação in vitro (MIV) de oócitos bovinos uma ferramenta importante para o estudo da reprodução feminina. Esta biotecnologia reprodutiva é utilizada para a triagem de moléculas e serve como modelo para investigação toxicológica em processos reprodutivos para humanos. A lectina de Bauhinia forficata (nBfL) é uma proteína capaz de se ligar de forma reversível ao açúcar N-acetilgalactosamina, acrescentando-a inúmeras funções, e uma delas é a atividade antiproliferativa nas células tumorais. No entanto, seus efeitos ainda não foram avaliados em gametas femininos. O objetivo do presente estudo foi determinar o efeito da adição de lectinas recombinantes de B. forficata no meio de maturação in vitro de oócitos bovinos sobre a expressão de genes relacionados às vias de estresse oxidativo. Para obtenção das proteínas, o gene para lectina recombinante (rBfL) e sua isoforma truncada (rtBfL) foram clonados e expressos em Escherichia coli (E. Coli). Os oócitos obtidos por punção folicular foram incubados em meio IVM por 24 horas contendo concentrações de 10 µg / mL, 50 µg / mL e 100 µg / mL de nBfL, rBfL e rtBfL e um grupo não tratado como controle. Foram avaliadas a expansão das células cumulus oophorus, o estágio de maturação meiótica e os níveis de óxido nítrico (NO) no meio de maturação. Nos grupos tratados com a concentração de 100 µg / mL, foram avaliadas a expressão gênica dos genes envolvidos em vias de estresse oxidativo SOD2, CAT, GPX-1, GSR, NOS2 e apoptose BAX, CASP3. A expansão das células do cumulus oophorus de oócitos tratados, bem como a taxa de maturação nuclear, não foram estatisticamente diferentes do grupo controle, embora a proteína rBfL tenha aumentado os níveis de NO em todos os tratamentos em relação ao grupo controle. A proteína rtBfL aumentou a expressão dos genes SOD2, GSR e NOS2 e todas as lectinas testadas aumentaram a expressão do gene CASP3 em comparação ao grupo controle. Esses achados indicam que as concentrações testadas das lectinas recombinantes de B. forficata provavelmente influenciam na expressão de genes relacionados ao estresse oxidativo e aumentam a expressão do gene apoptótico CASP3 durante a maturação in vitro de oócitos bovinos.