Obtenção e purificação de L-asparaginase de Zymomonas mobilis produzida por Escherichia colirecombinante

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Gonçalves, Vinícius de Lima
• Orientador(a): Alves, Tito Lívio Moitinho
• Banca de defesa: Ferraz, Helen Conceição, Coelho, Maria Alice Zarur
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal do Rio de Janeiro
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química
• Departamento: Instituto Alberto Luiz Coimbra de Pós-Graduação e Pesquisa de Engenharia
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Purificação; Cromatografia; Leucemia linfoblástica aguda
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/11422/13581

A leucemia linfoblástica aguda (LLA) é um câncer do sistema linfático com uma incidência importante, sobretudo, na população infantil. A enzima L-asparaginase tem uma reconhecida efetividade na terapia deste câncer. O Brasil não possui uma forma de produção desta enzima para uso clínico. Atualmente, pacientes com a doença dependem da importação do medicamento para prosseguir com o tratamento. Encontrar uma forma de produção nacional da L-asparaginase é de vital importância para melhorar a viabilidade e eficiência do tratamento da LLA. Nesse cenário, o presente trabalho estuda as condições de extração e purificação da enzima codificada pelo gene da bactéria Zymomonas mobilis expressado por via recombinante em Escherichia coli. Os processos de ruptura celular por homogeneizador a alta pressão e purificação cromatográfica em duas etapas foram estudados. Determinou-se que as melhores condições de rompimento são 300 bar e 4 passes. O primeiro passo cromatográfico foi pela cromatografia de afinidade por íons imobilizados e apresentou-se um fator de purificação de 12,1 com recuperação de 88%. O segundo passo foi pela cromatografia de troca iônica, a qual obteve um fator de purificação de 3,5 e recuperação de 69,5%. O grau de pureza obtido faz possível os estudos em animais desta enzima nacional e iniciar os trabalhos para um escalonamento do processo.