Caracterização fenotípica e molecular de amostras de Staphylococcus spp. isoladas de fluído de sonicação de implantes ortopédicos infectados

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Santos, Ingrid Nayara Marcelino [UNIFESP]
• Orientador(a): Pignatari, Antonio Carlos Campos [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Staphylococcus.; Biofilme; Resistência bacteriana.; Infecções ortopédicas.; Sonicação; Sequenciamento de Genoma Completo.
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/11600/65834

As infecções associadas a dispositivos ortopédicos (ODRIs) são causadas principalmente por Staphylococcus spp. formadores de biofilme, incluindo Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase negativo (CoNS). Nosso objetivo foi caracterizar a capacidade de formação de biofilme, virulência e o perfil de sensibilidade em isolados de Staphylococcus spp recuperados de fluido de sonicação de ODRIs, por métodos fenotípicos e moleculares. Foram coletados e analisados dados clínicos e microbiológicos de 32 pacientes, com ODRIs, entre os quais os implantes foram retirados e submetidos a sonicação. Os micro-organismos foram identificados pela técnica de dessorção em vôo de espectrometria de massa por ionização a laser assistida por matriz (MALDI-TOF MS). O teste de susceptibilidade antimicrobiana foi realizado por disco difusão e a técnica de microdiluição em caldo foram utilizadas para avaliar a concentração inibitória mínima (CIM) para a vancomicina. Os resultados foram interpretados de acordo com o European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST) e Brazilian Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (BrCAST) (2020). A detecção do gene, mecA e icaAB foi realizada por reação em cadeia da polimerase (PCR). Foi realizado o ensao qualitativo para avaliação da produção de biofilme em superfícies abióticas. No estudo realizada comparações de resultados utilizado o cálculo estatístico para o coeficiente de Kappa. O sequenciamento do genoma completo (SGC) foi feito usando a plataforma Illumina MiSeq. No geral, 32 Staphylococcus spp. foram isolados, S. aureus em 50% (16/32), S. epidermidis em 25% (8/32) e S. haemolyticus em 16% (6/32). Todos os isolados de S. aureus foram resistentes a meticilina e mecA positivos. Entre os SCoN a resistência foi observada foi de 56,2%. Na avaliação qualitativa da capacidade de formação de biofilme dos isolados em superfícies abióticas, 75% (N = 24/32) dos isolados foram fortes produtores de biofilme. A concordância entre detecção do gene icaAB e formação de biofilme pelo coeficiente de Kappa foi fraca. A análise de sequenciamento mostrou que entre 3 cepas de S. aureus, duas eram ST 5 e uma ST105. Os Sccmec encontrados foram tipo I, II e V. Os três isolados pertenciam ao CC5. Os genes de resistência e virulência de S. aureus foram detectados incluindo múltiplos genes codificadores de AMEs, mecA, blaZ, fnbA, sdrC, sdrD, sdrE, ebp. Entre os SCoN, notou-se uma grande variabilidade quando a presença de genes de que expressam aderência (MSCRAMMs), sendo os genes mais frequentemente identificados foram, atl, ebp e ebh A realização do SGC nestes isolados forneceu informações importantes e mais completas com relação a presença de múltiplos genes de resistência e de virulência, incluindo os genes associados a formação de biofilme. Este estudo oferece ferramentas para a melhor compreensão dos mecanismos envolvidos na patogênese destas infecções.