Aplicações da bioengenharia tecidual e do potencial anti-inflamatório e pró-angiogênico da proteína anexina A1 em heteroenxertos de pele acelular

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Mimura, Kallyne Kioko Oliveira [UNIFESP]
• Orientador(a): Oliani, Sonia Maria [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Tecidos suportes; Regeneração tecidual; Inflamação; Angiogênese; Biocompatibilidade
• Palavras-chave em Inglês: Fabrics holders; Tissue regeneration; Inflammation; Angiogenesis; Biocompatibility
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4013026; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46803

O desenvolvimento de substitutos de pele é essencial para superar a escassez de órgãos para transplante. Além disso, o uso de fármacos, capazes de modular os processos de inflamação e angiogênese, é de grande importância para o sucesso da regeneração tecidual. Objetivos: Padronizar técnicas de descelularização de pele suína, desenvolver matrizes de peles acelulares (scaffolds) sem cross-linking, avaliar a biocompatibilidade dos scaffolds e o potencial antiinflamatório/ pró-angiogênico do peptídeo AnxA12-26 da proteína anexina A1 em transplantes heterólogos. Materais e Métodos: Scaffolds (1 e 2), confeccionados sem cross-linking por dois tipos de protocolos de descelularização (digestão enzimática e choque osmótico), foram avaliados histológica, biomecânica e molecularmente. Para análise da biocompatibilidade, os scaffolds e o controle Permacol? (scaffold de derme suína com cross-linking e comercialmente disponível) foram implantados em ratos (Rattus novergicus) por 3, 14, 21 e 90 dias. O sangue periférico foi coletado para quantificação dos leucócitos e o plasma isolado para dosagem das citocinas pró-inflamatórias IL-6, TNF-? e IL-1?. Os implantes e tecidos adjacentes foram processados para as análises histopatológicas, imunohistoquímicas (vasos sanguíneos, miofibroblastos, células IL-6 positivas e macrófagos ED-1 / CCR7 / CD163) e moleculares (IL-1?, VEGF-A, TGF- ?1, COL3A1, COL1A1 e COL1A2). Nos experimentos seguintes, o scaffold 1, por apresentar melhores propriedades biológicas, foi usado para os transplantes em camundongos Balb/c sem e com tratamento com o peptídeo AnxA12-26 , 4 mg/kg, ip., nos períodos de 3, 10, 15 e 60 dias. No sangue periférico foi quantificado os leucócitos. Os scaffolds transplantados e tecidos adjacentes foram processados para análises histopatológicas, bioquímicas (dosagem de citocinas e fatores de crescimento) e moleculares (VEGF-A, FGFb, TGF- ?1 e ?-SMA). Resultados: Os métodos de descelularização foram efetivos em ambos os scaffolds (1 e 2), com preservação da matriz extracelular (glicosaminoglicanos e colágeno) e adequada resistência à tração pelos testes biomecânicos. Inicialmente, no 3° dia pós-implante, foi observado células polimorfonucleares junto aos scaffolds que, gradualmente foram substituídas, a partir do 14° dia, por células IL-6 positivas e macrófagos-M1. Após 21 dias, macrófagos-M2, miofibroblastos e vasos sanguíneos foram observados no interior dos scaffolds. Os eventos celulares observados no heteroenxerto de pele foram congruentes com a expressão gênica de fatores tróficos investigados e envolvidos na remodelação tecidual (IL-1?, TGF-?1, VEGF-A, COL1A1, COL1A2 e COL3A1). A administração do peptídeo AnxA12-26 nos transplantes heterólogos foi efetiva, pois diminuiu os mediadores pró-inflamatórios (IL-1?, IL-6, TNF-?, IL-17 e IFN-?) e aumentou a infiltração celular, os fatores próangiogênicos (VEGF-A, FGF-b e TGF-?1) e os miofibroblastos. Conclusão: Em conjunto, nossos resultados mostram a eficiência dos dois protocolos de descelularização, indicando que ambos scaffolds são biologicamente compatíveis, permitindo o recrutamento de células e a remodelação tecidual pela substituição gradual da matriz acelular. Ainda, nossos dados foram inovadores em relação ao papel da proteína AnxA1 no entendimento dos processos angiogênicos e inflamatórios no modelo experimental de transplantes heterólogos de peles acelulares.