Comparações genotípicas e fenotípicas de diferentes isolados clínicos de colonização e candidemia por Candida albicans

• Ano de defesa: 2009
• Autor(a) principal: Santos, Fernanda Pahim [UNIFESP]
• Orientador(a): Colombo, Arnaldo Lopes [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Candida albicans; Isolados clínicos; Genotipagem; Fenotipagem
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/9223

Introdução: Candida albicans faz parte da microbiota humana, entretanto pode causar infecção disseminada a depender das condições imunológicas do hospedeiro. Trata-se da espécie mais virulenta do gênero Candida, além de ser isolada com freqüência em infecções superficiais e sistêmicas. Alguns fatores de virulência são atualmente propostos para C. albicans, incluindo: adesão a células epiteliais e endoteliais do hospedeiro, a capacidade de secretar enzimas hidrolíticas, a transição de levedura à hifa e a capacidade de combate ao estresse oxidativo, gerado por células fagocitárias Objetivos: caracterizar atributos de virulência em diferentes isolados clínicos de C. albicans; analisar o relacionamento genético intraespecífico e, determinar o perfil de susceptibilidade dos mesmos. Material e Métodos: Foram incluídos 51 isolados sequencialmente obtidos de 7 pacientes alocados em 3 grupos: a) 3 pacientes que foram apenas colonizados (17 isolados); b) 3 pacientes colonizados que evluíram com candidemia e alta hospitalar (27 isolados); e c) 1 paciente colonizado que evoluiu com candidemia e óbito (7 isolados). Foram determinados os seguintes fatores de virulência: taxas de crescimento máximas, atividade de proteinase específica, atividade de fosfolipase, aderência de células de C. albicans à células epiteliais bucais humanas (CEBH), ensaio de morfogênese,formação do biolfilme. Foram realizados teste de susceptibilidade a antifúngicos (TSA) pelo método de microdiluição em caldo, utilizando anfotericina B, fluconazol, itraconazol, 5-fluorocitosina, caspofungina e anidulafungina. Para avaliar a variabilidade genética empregou-se técnica de microssatélites utilizando o “primer” M13, com posterior montagem de dendrograma. Foi também empregada a genotipagem ABC. Resultados: Observou-se que todas as cepas apresentaram similar taxa de crescimento, à exceção de um isolado (657B). As amostras apresentaram capacidade de aderência a CEBH e formação de hifa variáveis, não havendo associação direta entre estes atributos e o desfecho clínico do paciente. Na avaliação de secreção de Saps, os isolados do paciente 7, pertencente ao grupo III (candidemia/óbito), apresentaram os maiores valores de secreção desta enzima entre os isolados avaliados, seguida das cepas do paciente 4 (candidemia/alta). A produção de fosfolipase em nosso estudo foi homogênea para todos os isolados testados à exceção dos isolados do paciente 4 (candidemia/alta), o qual apresentou diversas cepas com atividade de fosfolipase negativa. Os pacientes 4 (candidemia/alta), e 7 (candidemia/óbito), obtiveram as maiores taxas de formação de biofilme entre todos os isolados testados. Quanto ao TSA, não houve ocorrência de resistência entre os isolados, porém uma única cepa (170 A) apresentou-se SDD frente a 5-fluorocitosina. As técnica de microssatelite e genotipagem ABC evidenciam que aquelas cepas dos grupos II e III apresentam uma menor variabilidade genética do que aquelas oriundas de pacientes do grupo I (somente colonização). Conclusão: Foi possível verificar que além do “status” imunológico do paciente, os aspectos intrínsecos de cada cepa são importantes determinantes do sucesso de sua trajetória como patógeno. Adicionalmente, destacamos a importância de ferramentas moleculares na detecção de genótipos melhor adaptados ao organismo humano, possivelmente responsáveis pelos piores prognósticos clínicos em ambiente hospitalar.