Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral
Ano de defesa: | 2015 |
---|---|
Autor(a) principal: | |
Orientador(a): | |
Banca de defesa: | , , |
Tipo de documento: | Dissertação |
Tipo de acesso: | Acesso aberto |
Idioma: | por |
Instituição de defesa: |
Universidade Federal de Uberlândia
|
Programa de Pós-Graduação: |
Programa de Pós-graduação em Engenharia Química
|
Departamento: |
Engenharias
|
País: |
BR
|
Palavras-chave em Português: | |
Área do conhecimento CNPq: | |
Link de acesso: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15259 https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365 |
Resumo: | Recombinant proteins expressed in cell culture have been shown to be relevant in the biopharmaceutical production focusing human heaths. Insulin, interferon and vaccine against B hepatitis are products obtained from recombinant expression system. Importantly, the precipitation is a widely used technique for separating proteins from a mixture due to its simplicity, and the process is incremented by the use of salts. This study initially dealt with the validation of the salt precipitation method by using the purified BSA and trypsin, and then, to investigate the precipitation process of recAVLOEc protein synthesized by cells of E. coli BL21 (DE3) pLysS used as expression system for the AVLO. This protein has shown antiviral activity and it found in the hemolymph of Lonoimia obliqua caterpillar. The precipitation was conducted by the use of conventional salts (ammonium sulfate and sodium sulfate) and the volatile salt ammonium carbamate. The proteins of the bacterial expression system were evaluated for their antiviral potential virus-infected cell cultures. Bacterial cells were resuspended in phosphate buffer and lysade by ultrasound. In the experimental procedure, the saturated salt solution (ammonium sulfate, sodium sulfate or ammonium carbamate) was added dropwise to the protein solution. This mixture was kept at constant temperature of 5°C for 24 h. The supernatant phase was separated from the precipitate phase by centrifugation. The protein precipitate obtained from bacterial lysate was then added to cultures of L929 and Vero cells to evaluate the cytotoxic effect; and cultures of these cells were subsequently infected with virus (EMC and measles). The results showed better efficiency of sodium sulfate on the precipitation of BSA compared to ammonium sulfate, while for trypsin, the ammonium carbamate showed more effective. Toxic effect on the culture of L929 cells was observed for the precipitate obtained by the use of ammonium sulfate and sodium sulfate. However, as expected, the precipitated protein obtained by the use of volatile ammonium carbamate salt showed a lower cytotoxic effect. Tests in L929 cultures infected with EMC, were performed; however, protein samples obtained by conventional and volatile salts used as a precipitating agent did not show antiviral action. In Vero cell cultures, the precipitated protein from cell lysate by sodium sulfate showed antiviral action for measles. |
id |
UFU_1233680f89269c44aacc2f59eee237e6 |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:repositorio.ufu.br:123456789/15259 |
network_acronym_str |
UFU |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFU |
repository_id_str |
|
spelling |
2016-06-22T18:41:55Z2016-03-302016-06-22T18:41:55Z2015-07-31CARVALHO, Kamilla Alves. Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral. 2015. 65 f. Dissertação (Mestrado em Engenharias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015. Disponível em: https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15259https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365Recombinant proteins expressed in cell culture have been shown to be relevant in the biopharmaceutical production focusing human heaths. Insulin, interferon and vaccine against B hepatitis are products obtained from recombinant expression system. Importantly, the precipitation is a widely used technique for separating proteins from a mixture due to its simplicity, and the process is incremented by the use of salts. This study initially dealt with the validation of the salt precipitation method by using the purified BSA and trypsin, and then, to investigate the precipitation process of recAVLOEc protein synthesized by cells of E. coli BL21 (DE3) pLysS used as expression system for the AVLO. This protein has shown antiviral activity and it found in the hemolymph of Lonoimia obliqua caterpillar. The precipitation was conducted by the use of conventional salts (ammonium sulfate and sodium sulfate) and the volatile salt ammonium carbamate. The proteins of the bacterial expression system were evaluated for their antiviral potential virus-infected cell cultures. Bacterial cells were resuspended in phosphate buffer and lysade by ultrasound. In the experimental procedure, the saturated salt solution (ammonium sulfate, sodium sulfate or ammonium carbamate) was added dropwise to the protein solution. This mixture was kept at constant temperature of 5°C for 24 h. The supernatant phase was separated from the precipitate phase by centrifugation. The protein precipitate obtained from bacterial lysate was then added to cultures of L929 and Vero cells to evaluate the cytotoxic effect; and cultures of these cells were subsequently infected with virus (EMC and measles). The results showed better efficiency of sodium sulfate on the precipitation of BSA compared to ammonium sulfate, while for trypsin, the ammonium carbamate showed more effective. Toxic effect on the culture of L929 cells was observed for the precipitate obtained by the use of ammonium sulfate and sodium sulfate. However, as expected, the precipitated protein obtained by the use of volatile ammonium carbamate salt showed a lower cytotoxic effect. Tests in L929 cultures infected with EMC, were performed; however, protein samples obtained by conventional and volatile salts used as a precipitating agent did not show antiviral action. In Vero cell cultures, the precipitated protein from cell lysate by sodium sulfate showed antiviral action for measles.Proteínas recombinantes, expressas em culturas celulares, têm se mostrado importantes na produção de fármacos de interesse para a saúde humana. Insulina, interferons e a vacina contra a hepatite B são exemplos de produtos obtidos a partir de sistemas recombinantes de expressão. A precipitação é uma técnica amplamente empregada para separação de proteínas a partir de uma mistura devido à sua simplicidade, sendo tal fato potencializado pelo uso de sais. Este estudo, inicialmente, abordou a validação do método de precipitação salina das proteínas puras BSA e tripsina e em adição a investigação do processo de precipitação da proteína recAVLOEc, sintetizada por células de E. coli BL21 (DE3) pLysS utilizadas como sistema de expressão. Tal proteína é originalmente encontrada na hemolinfa da lagarta Lonomia obliqua. A precipitação foi conduzida por meio do uso de sais convencionais (sulfato de amônio e de sódio) e do sal volátil carbamato de amônio. As células bacterianas foram ressuspendidas em tampão fosfato e submetidas à lise mecânica. No procedimento experimental estabelecido, o contato de um concentrado proteico com uma solução salina saturada (sulfato de amônio, sulfato de sódio ou carbamato de amônio) foi mantido por 24 horas a 5°C. O sobrenadante foi isolado do precipitado por meio de centrifugação e estas frações tiveram sua concentração proteica determinada através do método de Bradford. O precipitado proteico obtido do lisado bacteriano foi então administrado em culturas de células L929 e Vero para a avaliação do efeito citotóxico e posteriormente para a verificação da ação antiviral para o EMC e o sarampo. Os resultados demonstraram maior eficiência do sulfato de sódio na precipitação da BSA quando comparado ao sulfato de amônio. Enquanto que para a tripsina o carbamato de amônio foi mais efetivo. Um efeito tóxico em culturas de L929 foi observado para os precipitados obtidos pelo uso de sulfato de amônio e de sódio. Entretanto, como esperado, o precipitado proteico obtido pelo uso do sal volátil carbamato de amônio apresentou menor efeito citotóxico. Os testes em culturas de L929 infectadas com o vírus EMC foram efetuados e as amostras de proteínas precipitadas com os sais convencionais e o sal volátil não resultaram em ação antiviral. Em culturas de células Vero, o uso do sulfato de sódio como agente de precipitação das proteínas contidas no lisado bacteriano resultou em ação antiviral para o sarampo.Mestre em Engenharia Químicaapplication/pdfporUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Engenharia QuímicaUFUBREngenhariasProteínas - AnálisePrecipitação (Química)Agentes antiviraisCNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICAAvaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviralinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisResende, Miriam Maria dehttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4703538D3Batista, Fabiana Regina Xavierhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4779058Z2Watanabe, érika Ohtahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762096Z9Yokosawa, Jonnyhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723270U5Mendonça, Ronaldo Zucatellihttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4792621J7http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4828291P7Carvalho, Kamilla Alves81756974info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUTHUMBNAILAvaliacaoUsoSais.pdf.jpgAvaliacaoUsoSais.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1273https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15259/3/AvaliacaoUsoSais.pdf.jpgb2db39772478ea24fc7eb3938f361f12MD53ORIGINALAvaliacaoUsoSais.pdfapplication/pdf2724203https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15259/1/AvaliacaoUsoSais.pdf9a7ac78c337d4b7ffa65bfe8f8971a17MD51TEXTAvaliacaoUsoSais.pdf.txtAvaliacaoUsoSais.pdf.txtExtracted texttext/plain98665https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15259/2/AvaliacaoUsoSais.pdf.txt319d6206b921a9e400b08a0c37c38a5dMD52123456789/152592021-07-14 13:05:59.317oai:repositorio.ufu.br:123456789/15259Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-07-14T16:05:59Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
dc.title.por.fl_str_mv |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
title |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
spellingShingle |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral Carvalho, Kamilla Alves Proteínas - Análise Precipitação (Química) Agentes antivirais CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA |
title_short |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
title_full |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
title_fullStr |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
title_full_unstemmed |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
title_sort |
Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral |
author |
Carvalho, Kamilla Alves |
author_facet |
Carvalho, Kamilla Alves |
author_role |
author |
dc.contributor.advisor-co1.fl_str_mv |
Resende, Miriam Maria de |
dc.contributor.advisor-co1Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4703538D3 |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Batista, Fabiana Regina Xavier |
dc.contributor.advisor1Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4779058Z2 |
dc.contributor.referee1.fl_str_mv |
Watanabe, érika Ohta |
dc.contributor.referee1Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4762096Z9 |
dc.contributor.referee2.fl_str_mv |
Yokosawa, Jonny |
dc.contributor.referee2Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723270U5 |
dc.contributor.referee3.fl_str_mv |
Mendonça, Ronaldo Zucatelli |
dc.contributor.referee3Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4792621J7 |
dc.contributor.authorLattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4828291P7 |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Carvalho, Kamilla Alves |
contributor_str_mv |
Resende, Miriam Maria de Batista, Fabiana Regina Xavier Watanabe, érika Ohta Yokosawa, Jonny Mendonça, Ronaldo Zucatelli |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Proteínas - Análise Precipitação (Química) Agentes antivirais |
topic |
Proteínas - Análise Precipitação (Química) Agentes antivirais CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA |
dc.subject.cnpq.fl_str_mv |
CNPQ::ENGENHARIAS::ENGENHARIA QUIMICA |
description |
Recombinant proteins expressed in cell culture have been shown to be relevant in the biopharmaceutical production focusing human heaths. Insulin, interferon and vaccine against B hepatitis are products obtained from recombinant expression system. Importantly, the precipitation is a widely used technique for separating proteins from a mixture due to its simplicity, and the process is incremented by the use of salts. This study initially dealt with the validation of the salt precipitation method by using the purified BSA and trypsin, and then, to investigate the precipitation process of recAVLOEc protein synthesized by cells of E. coli BL21 (DE3) pLysS used as expression system for the AVLO. This protein has shown antiviral activity and it found in the hemolymph of Lonoimia obliqua caterpillar. The precipitation was conducted by the use of conventional salts (ammonium sulfate and sodium sulfate) and the volatile salt ammonium carbamate. The proteins of the bacterial expression system were evaluated for their antiviral potential virus-infected cell cultures. Bacterial cells were resuspended in phosphate buffer and lysade by ultrasound. In the experimental procedure, the saturated salt solution (ammonium sulfate, sodium sulfate or ammonium carbamate) was added dropwise to the protein solution. This mixture was kept at constant temperature of 5°C for 24 h. The supernatant phase was separated from the precipitate phase by centrifugation. The protein precipitate obtained from bacterial lysate was then added to cultures of L929 and Vero cells to evaluate the cytotoxic effect; and cultures of these cells were subsequently infected with virus (EMC and measles). The results showed better efficiency of sodium sulfate on the precipitation of BSA compared to ammonium sulfate, while for trypsin, the ammonium carbamate showed more effective. Toxic effect on the culture of L929 cells was observed for the precipitate obtained by the use of ammonium sulfate and sodium sulfate. However, as expected, the precipitated protein obtained by the use of volatile ammonium carbamate salt showed a lower cytotoxic effect. Tests in L929 cultures infected with EMC, were performed; however, protein samples obtained by conventional and volatile salts used as a precipitating agent did not show antiviral action. In Vero cell cultures, the precipitated protein from cell lysate by sodium sulfate showed antiviral action for measles. |
publishDate |
2015 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2015-07-31 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2016-06-22T18:41:55Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2016-03-30 2016-06-22T18:41:55Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/masterThesis |
format |
masterThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.citation.fl_str_mv |
CARVALHO, Kamilla Alves. Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral. 2015. 65 f. Dissertação (Mestrado em Engenharias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015. Disponível em: https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365 |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15259 |
dc.identifier.doi.por.fl_str_mv |
https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365 |
identifier_str_mv |
CARVALHO, Kamilla Alves. Avaliação do uso de sais na precipitação de uma proteína empregada como agente antiviral. 2015. 65 f. Dissertação (Mestrado em Engenharias) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2015. Disponível em: https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365 |
url |
https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15259 https://doi.org/10.14393/ufu.di.2015.365 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de Uberlândia |
dc.publisher.program.fl_str_mv |
Programa de Pós-graduação em Engenharia Química |
dc.publisher.initials.fl_str_mv |
UFU |
dc.publisher.country.fl_str_mv |
BR |
dc.publisher.department.fl_str_mv |
Engenharias |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal de Uberlândia |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Repositório Institucional da UFU instname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU) instacron:UFU |
instname_str |
Universidade Federal de Uberlândia (UFU) |
instacron_str |
UFU |
institution |
UFU |
reponame_str |
Repositório Institucional da UFU |
collection |
Repositório Institucional da UFU |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15259/3/AvaliacaoUsoSais.pdf.jpg https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15259/1/AvaliacaoUsoSais.pdf https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15259/2/AvaliacaoUsoSais.pdf.txt |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
b2db39772478ea24fc7eb3938f361f12 9a7ac78c337d4b7ffa65bfe8f8971a17 319d6206b921a9e400b08a0c37c38a5d |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU) |
repository.mail.fl_str_mv |
diinf@dirbi.ufu.br |
_version_ |
1792331409993498624 |