Desenvolvimento de genossensor eletroquímico para diagnóstico de meningite pneumocócica

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Ferreira, Fábio de Pádua
• Orientador(a): Madurro, Ana Graci Brito
• Banca de defesa: Alves, Valéria Almeida , Siquieroli, Ana Carolina Silva , Silva, Luís Antônio da
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Química
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Química; Meningite - Diagnóstico; Biossensores; Eletrodo modificado; Genossensor; Meningite pneumocócica; Modified electrode; Pneumococcal meningitis
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA
• Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/18654

As meningites pneumocócicas são provocadas pela bactéria Streptococcus pneumoniae e apresentam elevado índice de morbilidade e mortalidade. O diagnóstico precoce do agente causador da meningite é justificado pelo impacto positivo no tratamento, evitando possíveis complicações, tais como perda da audição, retardo mental, anormalidade motora e distúrbios visuais, reduzindo também as taxas de morbi-mortalidade. A identificação de microrganismos por meio de biossensores vem sendo amplamente estudada e sua eficiência constantemente comprovada. Os biossensores permitem realizar testes simples, rápidos, precisos e acessíveis. Neste trabalho foi utilizado eletrodo de grafite modificado com poli(4-aminofenol) para a imobilização de uma sequência sonda (Strep1) específica para o alvo complementar (Strep2), isoladas a partir de regiões conservadas do DNA de S. pneumoniae, visando o desenvolvimento de um genossensor específico para a meningite pneumocócica. A eletrodeposição de poli(4-aminofenol) sobre eletrodo de grafite foi confirmada por meio de técnicas voltamétricas e imagens de microscopia eletrônica de varredura. Após a modificação com poli(4-aminofenol) a superfície foi funcionalizada com a sonda específica para S. pneumoniae (Strep1), seguida do processo de hibridização com o alvo complementar (Strep2). Os resultados obtidos indicam que a presença do poli(4-aminofenol) causou um aumento na eficiência da imobilização da sonda de cerca de 12%, monitorando-se o pico de oxidação da guanina, quando comparada ao eletrodo de grafite descoberto. O tempo de hibridização entre Strep1(sonda):Strep2(alvo) foi otimizado e a detecção foi conduzida de forma direta e indireta, neste último caso, usando brometo de etídio como indicador. A plataforma foi capaz de reconhecer o DNA genômico da bactéria em soro humano. A performance do genossensor foi analisada frente a diferentes concentrações do DNA genômico, por meio da voltametria de pulso diferencial e a espectroscopia de impedância eletroquímica. Os limites de detecção obtidos em cada técnica foram de 54 ng mL-1 e 28 ng mL-1 respectivamente. O genossensor mostrou-se específico e seletivo. O sistema permaneceu estável até 60 dias de armazenamento. A análise topográfica da superfície do genossensor foi avaliada utilizando a microscopia de força atômica. Os resultados apresentados neste trabalho indicam que a plataforma poli(4-aminofenol)/Strep1 é promissora para o diagnóstico molecular da meningite pneumocócica em soro humano enriquecido.