Detecção de peptídeos de proteína hipotética de Leptospira interrogans e sua utilização na geração de anticorpos e em plataforma de diagnóstico sorológico

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Santos, Jandra Pacheco dos
• Orientador(a): Lima, Anna Monteiro Correia
• Banca de defesa: Medeiros-Ronchi, Alessandra Aparecida, Grazziotin, Ana Laura, Naves, João Helder Frederico de Faria, Rodrigues, Renata Santos, Fujiwara, Ricardo Toshio
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso embargado
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Uberlândia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Ciências Veterinárias
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Anticorpos aviários; Bioinformática; Bovinos; Diagnóstico indireto; ELISA; Leptospirose; Avian antibodies; Bioinformatic; Bovine; Indirect diagnostic; Leptospirosis; Bovinos - Doenças; Veterinária
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS
• Link de acesso: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25755; http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2019.1254

As leptospiras patogênicas são reconhecidas como agentes responsáveis pela leptospirose, uma doença infectocontagiosa, reemergente e uma das zoonoses de maior ocorrência em todo o mundo, principalmente em países com clima tropical, como o Brasil. No primeiro capítulo dessa Tese, foram apresentadas as considerações gerais sobre a bactéria e o uso de ferramentas de bioinformática e anticorpos IgY contra leptospirose. No segundo capítulo os objetivos foram a identificação in silico de alvos com potencial para aplicação no diagnóstico de leptospirose e também no desenvolvimento de vacinas. Foram comparados 80 genomas de Leptospira usando Leptospira interrogans sorovar Lai como referência. Foram detectados 1096 genes não homólogos a hospedeiros de Leptospira, dos quais foram preditas 212 proteínas putativas expostas na membrana e 87 antígenos secretados. Foram identificadas 37 proteínas como candidatas promissoras para a produção de tecnologias para diagnóstico e desenvolvimento de vacinas. Entre a proteínas de interesse preditas, 43,2% (16/37) ainda não possuem descrição de agrupamento em superfamílias ou famílias de proteínas. No terceiro capítulo, foi avaliado o desenvolvimento de anticorpos policlonais IgY e IgG a partir da inoculação de galinhas e coelhos, respectivamente, com epítopos quimicamente sintetizados e preditos a partir de uma proteína hipotética de L. interrogans. Foram selecionados três epítopos de células B (P127, P128 e P129). Foram obtidos 8,05 ± 0,55 mg/mL de anticorpos IgY totais extraídos da gema. Na padronização de plataforma de enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), o peptídeo com maior indução de resposta humoral foi o P127. O título máximo obtido para IgY sérica e da gema foi 1.600 e 200, respectivamente, e para os coelhos 800. Na reação de imunofluorescência indireta (RIFI) os anticorpos IgY (1:50) reconheceram as Leptospira. Nessa pesquisa, os peptídeos sintéticos de L. interrogans induziram a produção de anticorpos IgY específicos e mostraram-se promissores para a sua utilização em plataformas ELISA e RIFI destinadas ao estudo da leptospirose. No quarto capítulo, o objetivo foi a padronização de uma plataforma ELISA com o uso dos peptídeos sintéticos (ELISAPeptídeo) de L. interrogans (P127, P128 e P129) para o diagnóstico da leptospirose bovina. P127 demonstrou a melhor reatividade na otimização e foi selecionado para os testes de padronização utilizando soros bovinos de dois rebanhos (RB1, n=80; RB2, n=100). A sensibilidade e a especificidade relativas (ELISA versus MAT), para RB1 e RB2 foram 85% - 93% e 78% - 80%, respectivamente. Os índices Kappa para RB1 e RB2 foram 78% (bom) e 58% (regular), respectivamente. Neste estudo, os peptídeos sintéticos de proteína hipotética de L. interrogans foram reconhecidos por anticorpos IgG séricos de bovinos naturalmente expostos à bactéria. Os epítopos de proteínas hipotéticas de L. interrogans preditos por meio de imunoinformática são promissores para o desenvolvimento de biológicos específicos, plataformas ELISA e RIFI, e são reconhecidos por anticorpos de infecção natural.