Padroniza??o do cultivo do fungo filamentoso isolado A4 para produ??o de lipases
Ano de defesa: | 2020 |
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Resumo: | Enzimas produzidas por fungos filamentosos t?m demonstrado amplas aplica??es biotecnol?gicas nos mais diversos segmentos industriais. Para suprimento dessa demanda, h? uma crescente busca por novas linhagens de fungos produtores dessas enzimas, levando ao isolamento e sele??o a partir dos mais diferentes biomas. Esse trabalho objetivou analisar a temperatura dos fungos filamentosos, selecionar um fungo filamentoso potencialmente capaz de produzir lipase e otimizar a produ??o da enzima pelo micro-organismo selecionado. Inicialmente foi analisado a temperatura de crescimento de vinte e um fungos filamentosos do laborat?rio em meio Aveia e meio BDA, a fim de verificar a melhor temperatura de crescimento de cada micro-organismo. Os fungos em meio aveia com maiores taxas de crescimento a diferentes temperaturas foram o 3.8TA, P3, MB2.9, MB2.12, 4.2 e B8, e em meio BDA foram o 3.8TA, P3, M2.3, C421, B8, 4.2 e A4. Os vinte e um fungos foram testados quanto a sua capacidade de produ??o de lipases em meio contendo Tween? 80, sendo que destes micro-organismos dois (M1.1 e A4) apresentaram halo de atividade lipol?tica quando utilizado a solu??o reveladora, optando-se pelo fungo A4 para prosseguir com o trabalho. Em seguida, o fungo filamentoso A4 foi incubado em quatro meios submersos distintos (Vogel, Adams, Khanna, e SR), ? 30 ?C, em estufa bacteriol?gica, de forma estacion?ria, durante oito dias e retirados a cada vinte e quatro horas, sendo o meio que apresentou uma melhor atividade lipol?tica o Khanna (2,32 U.mL-1) ap?s 120 horas de cultivo. Ap?s definir o meio de cultivo submerso, variou-se sua composi??o, analisando fonte de nitrog?nio (extrato de levedura, peptona, ureia, nitrato de pot?ssio e suas combina??es). Para a fonte de nitrog?nio o melhor valor de atividade lipol?tica obtido foi 2,15 U.mL-1 (ureia + peptona + KNO3) pelo fungo filamentoso A4. Em seguida, foram analisadas diferentes fontes de sais (sais Vogel, sais CP, sais SR e suas combina??es), estabelecendo a suplementa??o do meio com sais Vogel. Analisou-se, tamb?m, o efeito da varia??o do pH inicial do meio de cultura (pH iniciais 4,0; 4,5; 5,0; 5,5 e 6,0), determinando o 4,5 como ideal para crescimento do isolado A4 e produ??o de lipases. Por fim, analisou-se a influ?ncia de diferentes ?leos (soja, milho, girassol, dend? e algod?o) como fonte de carbono, e o fungo A4 apresentou uma melhor atividade enzim?tica em meio de cultura suplementado com ?leo de algod?o (171,36 U.mL-1). Esses resultados demonstram a import?ncia da sele??o de fungos filamentosos como recurso biotecnol?gico, em especial para a produ??o de enzimas lipol?ticas. A otimiza??o resultou em um aumento na produ??o da enzima, abrindo perspectivas para a otimiza??o do processo de fermenta??o submersa utilizando processos de baixo custo. |
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Costa, Tatiana PaulaNelson, David LeeBenassi, Vivian MachadoReis, Arlete Barbosa dosPires, Juliana Rocha de MeiraBenassi, Vivian MachadoPinto, N?sia Andrade Villela DessimoniUniversidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)2021-06-01T18:18:26Z2021-06-01T18:18:26Z20202020-03-18COSTA, Tatiana Paula. Padroniza??o do cultivo do fungo filamentoso isolado A4 para produ??o de lipases. 2020. 78 p. Disserta??o (Mestrado em Biocombust?veis) ? Programa de P?s-gradua??o em Biocombust?veis, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, Diamantina, 2020.http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/handle/1/2566Enzimas produzidas por fungos filamentosos t?m demonstrado amplas aplica??es biotecnol?gicas nos mais diversos segmentos industriais. Para suprimento dessa demanda, h? uma crescente busca por novas linhagens de fungos produtores dessas enzimas, levando ao isolamento e sele??o a partir dos mais diferentes biomas. Esse trabalho objetivou analisar a temperatura dos fungos filamentosos, selecionar um fungo filamentoso potencialmente capaz de produzir lipase e otimizar a produ??o da enzima pelo micro-organismo selecionado. Inicialmente foi analisado a temperatura de crescimento de vinte e um fungos filamentosos do laborat?rio em meio Aveia e meio BDA, a fim de verificar a melhor temperatura de crescimento de cada micro-organismo. Os fungos em meio aveia com maiores taxas de crescimento a diferentes temperaturas foram o 3.8TA, P3, MB2.9, MB2.12, 4.2 e B8, e em meio BDA foram o 3.8TA, P3, M2.3, C421, B8, 4.2 e A4. Os vinte e um fungos foram testados quanto a sua capacidade de produ??o de lipases em meio contendo Tween? 80, sendo que destes micro-organismos dois (M1.1 e A4) apresentaram halo de atividade lipol?tica quando utilizado a solu??o reveladora, optando-se pelo fungo A4 para prosseguir com o trabalho. 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Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2021-06-01T18:17:49Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tatiana_paula_costa.pdf: 854193 bytes, checksum: cdfd516197805e0008e0e3641cd4904c (MD5)Approved for entry into archive by Jos? Henrique Henrique (jose.neves@ufvjm.edu.br) on 2021-06-01T18:18:26Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tatiana_paula_costa.pdf: 854193 bytes, checksum: cdfd516197805e0008e0e3641cd4904c (MD5)Made available in DSpace on 2021-06-01T18:18:26Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) tatiana_paula_costa.pdf: 854193 bytes, checksum: cdfd516197805e0008e0e3641cd4904c (MD5) Previous issue date: 2020Disserta??o (Mestrado) ? Programa de P?s-gradua??o em Biocombust?veis, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2020.Enzymes produced by filamentous fungi have had extensive biotechnological applications in the most diverse industrial segments. To supply this demand, there is a growing search for new strains of fungi that produce these enzymes, leading to isolation and selection from the most varied biomes. This work sought to determine the ideal temperature for growth of the filamentous fungi, select a filamentous fungus potentially capable of producing lipase and optimize the production of the enzyme by the selected microorganism. Initially, the growth temperatures of 21 filamentous fungi from the laboratory were analyzed in Oat medium and BDA medium to verify the best growth temperature of each microorganism. The fungi in Oat medium with the highest growth rates at different temperatures were 3.8TA, P3, MB2.9, MB2.12, 4.2 and B8, and those with the highest growth rates in BDA medium were 3.8TA, P3, M2.3, C421, B8 , 4.2 and A4. The 21 fungi were tested for their ability to produce lipases in medium containing Tween? 80, two of which (M1.1 and A4) presented halos of lipolytic activity when the developing solution was applied. The fungus A4 was chosen for further work. The filamentous fungus A4 was incubated in four different submerged media (Vogel, Adams, Khanna, and SR) at 30 ?C in a bacteriological oven, stationary, for eight days. Aliquots were removed every twenty-four hours. The greatest lipolytic activity was observed with the Khanna medium (2.32 U.mL-1) after 120 hours of cultivation. After defining the submerged culture medium, its composition was varied to determing the best nitrogen source (yeast extract, peptone, urea, potassium nitrate and their combinations). For the nitrogen source, the highest lipolytic activity obtained was 2.15 U.mL-1 (urea, peptone and KNO3) with the filamentous fungus A4. Dfferent sources of salts (Vogel salts, CP salts, SR salts and their combinations) were analyzed, and the supplementation of the medium with Vogel salts was established. The effect of the variation of the initial pH of the culture medium (initial pH 4.0; 4.5; 5.0; 5.5 and 6.0) was also determined, and pH 4.5 was ideal for growth of A4 isolate and for lipase production. Finally, the influence of different oils (soy, corn, sunflower, palm and cotton) as a carbon source was determined. The greatest enzymatic activity for the fungus A4 was observed in culture medium supplemented with cotton oil (171.36 U.mL-1). These results demonstrate the importance of selecting filamentous fungi as a biotechnological resource, especially for the production of lipolytic enzymes. The optimization resulted in an increase in the production of the enzyme, which opens perspectives for the optimization of the submerged fermentation process using low cost processes.porUFVJMA concess?o da licen?a deste item refere-se ao ? termo de autoriza??o impresso assinado pelo autor, assim como na licen?a Creative Commons, com as seguintes condi??es: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publica??o, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus reposit?rios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei n? 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permiss?es assinaladas, para fins de leitura, impress?o e/ou download, a t?tulo de divulga??o da produ??o cient?fica brasileira, e preserva??o, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessPadroniza??o do cultivo do fungo filamentoso isolado A4 para produ??o de lipasesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisLipasesFungo filamentosoEnzimaFilamentous fungusEnzymereponame:Repositório Institucional da UFVJMinstname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)instacron:UFVJMTEXTtatiana_paula_costa.pdf.txttatiana_paula_costa.pdf.txtExtracted texttext/plain153633http://acervo.ufvjm.edu.br/jspui/bitstream/1/2566/6/tatiana_paula_costa.pdf.txtfa07fc3c0404e29ecfde1b56b9730576MD56LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; 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