Expressão heteróloga da proteína não estrutural (NS1) do vírus dengue-2 visando a produção de antígenos para kits diagnósticos

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2013
Autor(a) principal: Amaro, Marilane de Oliveira Fani
Orientador(a): Paula, Sérgio Oliveira de lattes
Banca de defesa: Siqueira-batista, Rodrigo lattes, Oliveira, Leandro Licursi de lattes, Eller, Monique Renon lattes, Paiva, Aline Dias lattes
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa
Programa de Pós-Graduação: Doutorado em Biologia Celular e Estrutural
Departamento: Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos
País: BR
Palavras-chave em Português:
Kits diagnósticos
Dengue
Expressão heteróloga
Palavras-chave em Inglês:
Diagnostic kits
Dengue
Heterologous expression
Área do conhecimento CNPq:
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL
Link de acesso: http://locus.ufv.br/handle/123456789/265
Resumo: Dengue is one of the most important diseases caused by arboviruses in the world, being reported in the last twenty years a significant increase in geographical distribution, continuous transmission of various serotypes and emergence of hemorrhagic fever in areas where the disease was not prevalent. Despite the methodological processes of diagnosis of dengue are at present in-depth development and improvement, a hindrance to the realization of diagnostic tests for dengue is the difficulty of large-scale production of antigens for use in diagnostic tests.Due to this demand, the aim of this work was to obtain the nonstructural protein 1 (NS1) of dengue serotype 2 by heterologous expression in Nicotiana tabacum and the construction of a vector optimized for expression in plants in order to raise the levels of expression recombinant protein in transgenic plants and facilitate their purification. Upon confirmation of expression in Nicotiana tabacum, the heterologous protein was characterized by immunoblotting. In enzyme immunoassay recombinant NS1 protein, presented as potential antigen for the development of dengue diagnostic kits and the confirmed transformation of Agrobacterium tumefaciens with the optimized vector was confirmed. Further studies will verify the expression of recombinant NS1 protein in Arabidopsis thaliana and its potential use in diagnostic kits.
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Tese (Doutorado em Análises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidos) - Universidade Federal de Viçosa, Viçosa, 2013.http://locus.ufv.br/handle/123456789/265Dengue is one of the most important diseases caused by arboviruses in the world, being reported in the last twenty years a significant increase in geographical distribution, continuous transmission of various serotypes and emergence of hemorrhagic fever in areas where the disease was not prevalent. Despite the methodological processes of diagnosis of dengue are at present in-depth development and improvement, a hindrance to the realization of diagnostic tests for dengue is the difficulty of large-scale production of antigens for use in diagnostic tests.Due to this demand, the aim of this work was to obtain the nonstructural protein 1 (NS1) of dengue serotype 2 by heterologous expression in Nicotiana tabacum and the construction of a vector optimized for expression in plants in order to raise the levels of expression recombinant protein in transgenic plants and facilitate their purification. Upon confirmation of expression in Nicotiana tabacum, the heterologous protein was characterized by immunoblotting. In enzyme immunoassay recombinant NS1 protein, presented as potential antigen for the development of dengue diagnostic kits and the confirmed transformation of Agrobacterium tumefaciens with the optimized vector was confirmed. Further studies will verify the expression of recombinant NS1 protein in Arabidopsis thaliana and its potential use in diagnostic kits.A dengue é uma das doenças mais importantes causada por arbovírus no mundo, sendo observado nos últimos vinte anos um aumento significativo na distribuição geográfica, transmissão contínua de vários sorotipos e emergência da Febre hemorrágica em áreas onde a doença não era prevalente. Apesar dos processos metodológicos de diagnóstico da dengue estarem na atualidade em profundo desenvolvimento e aperfeiçoamento, um empecilho para a realização de testes diagnósticos para dengue reside na dificuldade de produção em grande escala de antígenos a serem utilizados em testes diagnósticos. Devido a esta demanda, os objetivos deste trabalho foram a obtenção da proteína não estrutural 1(NS1) do sorotipo dengue 2, através da expressão heteróloga em Nicotiana tabacum e a construção de um vetor otimizado para expressão em plantas com o intuito de elevar os níveis de expressão da proteína recombinante nas plantas transgênicas e facilitar sua purificação. Após a confirmação da expressão em Nicotina tabacum, a proteína heteróloga foi caracterizada por imunoblot. Em ensaio imunoenzimático a proteína NS1 recombinante, apresentou potencial como antígeno para desenvolvimento de Kits de diagnóstico da dengue e foi confirmado a transformação de Agrobacterium tumefaciens com o vetor otimizado. Estudos posteriores verificarão a expressão da proteína NS1 recombinante em Arabidopsis thaliana e sua potencial utilização em Kits diagnósticos.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superiorapplication/pdfporUniversidade Federal de ViçosaDoutorado em Biologia Celular e EstruturalUFVBRAnálises quantitativas e moleculares do Genoma; Biologia das células e dos tecidosKits diagnósticosDengueExpressão heterólogaDiagnostic kitsDengueHeterologous expressionCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERALExpressão heteróloga da proteína não estrutural (NS1) do vírus dengue-2 visando a produção de antígenos para kits diagnósticosHeterologous expression of the nonstructural protein (NS1) of dengue virus-2 aimed at the production of antigens for diagnostic kitsinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:LOCUS Repositório Institucional da UFVinstname:Universidade Federal de Viçosa (UFV)instacron:UFVORIGINALtexto completo.pdfapplication/pdf5422564https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/265/1/texto%20completo.pdfe78246870726f6f72c389adfd82f347aMD51TEXTtexto completo.pdf.txttexto completo.pdf.txtExtracted texttext/plain100153https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/265/2/texto%20completo.pdf.txt2ad5058f04b9f3a48e8281069dd9d70cMD52THUMBNAILtexto completo.pdf.jpgtexto completo.pdf.jpgIM Thumbnailimage/jpeg3725https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/265/3/texto%20completo.pdf.jpgbc5d4d8772a40e2eec18416f32e30843MD53123456789/2652016-04-06 23:01:08.451oai:locus.ufv.br:123456789/265Repositório InstitucionalPUBhttps://www.locus.ufv.br/oai/requestfabiojreis@ufv.bropendoar:21452016-04-07T02:01:08LOCUS Repositório Institucional da UFV - Universidade Federal de Viçosa (UFV)false
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