Análise da expressão temporal de oito genes candidatos a efetores de Phakopsora pachyrhizi e localização subcelular das proteínas codificadas em Nicotiana benthamiana

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Melo, Bernardo do Vale Araújo
• Orientador(a): Brommonschenkel, Sérgio Hermínio
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa
• Programa de Pós-Graduação: Fitopatologia
• Área do conhecimento CNPq: Ciências Agrárias
• Link de acesso: https://locus.ufv.br//handle/123456789/30073

Durante a sua interação com a soja, o fungo Phakopsora pachyrhizi secreta e transloca para a célula vegetal várias proteínas efetoras com função de suprimir as respostas de defesa e/ou favorecer o seu parasitismo. Por meio da análise do transcritoma da interação soja- Phakopsora pachyrhizi vários genes que codificam proteínas candidatas a efetoras já foram identificados, mas a função da maioria dessas proteínas na patogênese ainda é desconhecida. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi caracterizar genes candidatos a efetores de P. pachyrhizi, analisando a sua expressão temporal durante a infecção e localização subcelular das proteínas codificadas. Para isso, candidatos a efetores obtidos a partir de estudos de proteômica e transcritômica foram analisados e oito genes (EC3318, EC23, CSEP07, CSEP09, RTP1, HESP-C49, PHPA_29 e PHPA_43) foram selecionados, com base na expressão durante a infecção, presença de sequência codificadora do peptídeo sinal de secreção e alta identidade com genes que codificam proteínas efetoras de outras espécies de fungos causadores de ferrugens. Os genes selecionados apresentaram diferentes padrões de expressão, mas a maioria apresentou pico de expressão 24 horas após a inoculação, momento de início de formação dos haustórios do patógeno. As proteínas fusionadas a GFP foram expressas em folhas de Nicotiana benthamiana juntamente com proteínas marcadoras de compartimentos subcelulares e observadas em microscópio confocal de varredura a laser. A proteína EC23 se localizou exclusivamente no citoplasma, enquanto as proteínas EC3318, CSEP07, CSEP09, Hesp-C49, PHPA_29 e PHPA_43 se localizaram no citoplasma e no núcleo. O padrão de expressão dos genes e a localização subcelular das proteínas codificadas são condizentes com um provável papel efetor durante a patogênese em soja.