Erwinia psidii - Eucalyptus spp.: colonization, genetic variability, aggressiveness and immunological test for pathogen detection

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Montoya Estrada, Claudia Nohemy
• Orientador(a): Alfenas, Acelino Couto
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: eng
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Viçosa
• Área do conhecimento CNPq: Fitopatologia
• Link de acesso: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/22171

Seca de ponteiros, causada por Erwinia psidii é atualmente uma das doenças emergentes mais severas na cultura do eucalipto. Apesar de sua importância econômica, em virtude dos riscos que pode causar na eucaliptocultura, pouco se sabe sobre este patossistema. Assim, neste trabalho, a partir de cortes histológicos, estudou-se o processo de colonização em plantas de eucalipto usando um isolado de E. psidii transformado com gfp, estimou-se a variabilidade genética das populações do patógeno por meio de marcadores moleculares rep– PCR (ERIC, REP e BOX) e desenvolveu-se um imunoteste para detecção rápida de E. psidii usando colônias puras isoladas de plantas sintomáticas e assintomáticas. Neste estudo, conseguiu-se transformar E. psidii com pGreen-TIR e demonstrar que o plasmídeo é estável na ausência de seleção com antibióticos in vitro e in vivo. Usando microscopia de fluorescência, demonstrou-se que a colonização de E. psidii nos tecidos não está restrita ao ponto de inoculação (axila foliar). E. psidii coloniza os vasos do xilema, esclerênquima e parênquima das folhas e caule do eucalipto. Aos 35 dias após a inoculação (dai), a bactéria encontrava-se a 5 cm acima do ponto de inoculação, indicando que foi capaz de colonizar a planta acropetalmente, acompanhando o fluxo da água e nutrientes. Análises por microscopia confocal de amostras de plantas inoculadas via sistema raicular revelaram que E. psidii penetra e coloniza raízes primárias e secundárias e atinge os vasos do xilema. No entanto, nos tempos após inoculação avaliados neste estudo, a bactéria ficou restrita nas raízes e não atingiou o caule da planta. Estudos adicionais avaliando tempos após inoculação maiores devem ser realizados para confirmar esses resultados. Acredita-se que E. psidii seja disseminada a partir de mudas infectadas assintomáticas. Análises moleculares (rep-PCR) de 101 isolados de E. psidii obtidos de Eucalyptus spp. e cinco isolados de goiabeira (Psidium guajava) indicam que as populações de E. psidii do Brasil apresentam baixa variabilidade genética. Observou-se, contudo, o agrupamento dos isolados por espécie hospedeira, embora dois isolados de goiaba (LPF681 e LPF682) agruparam-se com os de eucalipto (LPF609). Testes de Wilcoxon e ANOVA dos dados de severidade e AACPD para diferentes isolados da bactéria inoculados em dois clones de eucalipto indicaram que há interação isolado × clone. A AACPD e a severidade da doença variaram significativamente entre isolados e nos dois clones testados. A variabilidade em agressividade entre isolados de E. psidii demonstraram a importância do emprego de isolados mais agressivos para a seleção de genótipos de eucalipto resistentes para plantio em escala comercial. O anti-soro contra o isolado LPF534 de E. psidii (Anti-Ep), obtido neste estudo, reagiu positivamente contra todos os isolados de E. psidii testados, incluindo alguns isolados de goiaba. O teste de aglutinação desenvolvido com este anti-soro é importante para o diagnóstico de E. psidii, por representar uma alternativa rápida e de baixo custo, em comparação com métodos baseados em PCR para a detecção do patógeno em plantas assintomáticas.