FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2008
Autor(a) principal: Cardoso, Alisson Campos, 1983-
Orientador(a): Não Informado pela instituição
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: [s.n.]
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Regulação da expressão gênica
Interação proteína-proteína
Transdução de sinal celular
Gene expression regulation
Protein, protein interaction
Cellular signal transduction
Link de acesso: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766
Resumo: Orientador: Kleber Gomes Franchini
id UNICAMP-30_9aa825ddee13e4b1859ffc13444408da
oai_identifier_str oai::431657
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanicoFAK interacts with MEF2 and drives the stretch-induced activation of an intronic enhancer of phospholamban gene in cardiomyocytesRegulação da expressão gênicaInteração proteína-proteínaTransdução de sinal celularGene expression regulationProtein, protein interactionCellular signal transductionOrientador: Kleber Gomes FranchiniDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: Estudos anteriores demonstraram que em miócitos cardíacos submetidos a estímulos mecânicos ocorre pronta fosforilação e ativação da FAK. Resultados de estudos recentes, realizados em corações de ratos indicaram que em resposta a estímulos mecânicos, a FAK, além de ser ativada, localiza-se no núcleo dos miócitos cardíaco. Estudos conduzidos em corações de ratos Wistar adultos, utilizando a técnica de Imunoprecipitação de cromatina (ChIP) com anticorpo anti- FAK, identificaram uma seqüência intrônica de 182pb do gene fosfolambam (plnil), contendo sítio para a ligação do fator de transcrição MEF2. Portanto, no presente estudo, investigamos se a região intrônica do gene que codifica o fosfolamban tem função regulatória transcricional. Utilizando técnicas de EMSA (Ensaio de retardamento da mobilidade eletroforética), ensaios de Precipitação e de gene reporter, avaliamos a interação entre a FAK e plnil além da função regulatória transcricional dessa seqüência. Como resultado, demonstramos que ocorre pronta ativação da FAK e seu acúmulo no núcleo de miócitos cardíacos de ventrículo esquerdo de ratos submetidos a coarctação da aorta. Através de ensaios de EMSA, demonstramos que proteínas nucleares de ventrículo esquerdo de ratos submetidos a sobrecarga pressórica, apresentaram um aumento na interação com a sonda plni1 em relação aqueles de ratos controles. Também, ensaios de EMSA indicaram uma interação entre MEF2 e a sonda plnil, mas não entre a FAK ou seus domínios (FERM e Cterminal) com a sonda plnil. Ensaios de precipitação com fragmentos recombinantes da FAK (GST-FERM e GSTCterminal) com extratos nucleares de coração de ratos coarctados indicaram uma associação entre FAK e MEF2. Ensaios adicionais demonstraram que a interação entre FAK e MEF2 é dependente do domínio Cterminal e do estado fosforilado da FAK. Estudos de transfecção com gene reporter, utilizando plasmídeo contendo a seqüência plnil, em cultura de miócitos cardíacos submetidos ao estiramento, demonstraram que a região intrônica plnil possui função regulatória transcricional e esse papel é dependente da ligação do fator de transcrição MEF2 ao seu sítio específico no DNA. Portanto, esses dados indicam que FAK e MEF2 podem estar envolvidos na regulação da expressão do gene pln através de regulação mediado pela região intrônica plnil.Abstract: Previous studies have shown that mechanical stress induces phosphorylation and activation of FAK in cardiac myocytes. Recent studies carried out in rat overloaded hearts indicated that FAK re-locates in the nucleus of the cardiac myocytes. By assays in the nuclei of overloaded cardiac myocytes with chromatin immunoprecipitation (ChIP) approach with anti-FAK antibody, we identified an intronic sequence of phospholamban gene (plnil), containing a MEF2 consensus site. In the present study, we investigated whether Plnil has any regulatory function in the pln. To accomplish this, we combinated techniques such as EMSA (Electrophoreses Mobility Shift Assay), reporter gene and pulldown assays. FAK was shown to be rapidly activated and to accumulate in the nuclei of cardiac myocytes taken from overloaded left ventricle. Using EMSA assays, we demonstrated that nuclear extracts of left ventricle rats overloaded, interacted with the plnil probe. EMSA assays, also indicated an interaction between MEF2 and the plnil probe, but no interaction was found between FAK or its domains (FERM and Cterminal) with the plni1. Pulldown assays with FAK recombinant fragments (GST-FERM and GST-Cterminal) and nuclear extracts from left ventricle overloaded indicated that FAK and MEF2 physically interact through FAK Cterminal domain. Reporter gene assays, using a construction of plnil coupled luciferase transfected to cardiac myocytes culture underwent stretching, had demonstrated that the intronic region has transcriptional regulatory function and this role is dependent of the transcription factor MEF2 binding site in the DNA. Therefore, these data indicate that FAK and MEF2 interact in the nuclei of cardiac myocytes and that FAK/MEF2 complex may regulate phospholamban gene expression through the plnil.MestradoMedicina ExperimentalMestre em Fisiopatologia Médica[s.n.]Franchini, Kleber Gomes, 1961-Oliveira, Marcos Antonio deTasic, LjubicaUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Fisiopatologia MédicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASCardoso, Alisson Campos, 1983-20082008-04-08T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf82f. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766CARDOSO, Alisson Campos. FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico. 2008. 82f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766. Acesso em: 25 abr. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/431657porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T05:17:45Zoai::431657Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T05:17:45Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
FAK interacts with MEF2 and drives the stretch-induced activation of an intronic enhancer of phospholamban gene in cardiomyocytes
title FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
spellingShingle FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
Cardoso, Alisson Campos, 1983-
Regulação da expressão gênica
Interação proteína-proteína
Transdução de sinal celular
Gene expression regulation
Protein, protein interaction
Cellular signal transduction
title_short FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
title_full FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
title_fullStr FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
title_full_unstemmed FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
title_sort FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico
author Cardoso, Alisson Campos, 1983-
author_facet Cardoso, Alisson Campos, 1983-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Franchini, Kleber Gomes, 1961-
Oliveira, Marcos Antonio de
Tasic, Ljubica
Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Ciências Médicas
Programa de Pós-Graduação em Fisiopatologia Médica
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Cardoso, Alisson Campos, 1983-
dc.subject.por.fl_str_mv Regulação da expressão gênica
Interação proteína-proteína
Transdução de sinal celular
Gene expression regulation
Protein, protein interaction
Cellular signal transduction
topic Regulação da expressão gênica
Interação proteína-proteína
Transdução de sinal celular
Gene expression regulation
Protein, protein interaction
Cellular signal transduction
description Orientador: Kleber Gomes Franchini
publishDate 2008
dc.date.none.fl_str_mv 2008
2008-04-08T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv (Broch.)
https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766
CARDOSO, Alisson Campos. FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico. 2008. 82f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766. Acesso em: 25 abr. 2024.
identifier_str_mv (Broch.)
CARDOSO, Alisson Campos. FAK interage com MEF2 e ativa região intronica regulatoria do fosfolamban em resposta ao estimulo mecanico. 2008. 82f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766. Acesso em: 25 abr. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1607766
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/431657
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
82f. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1797405409579892736

Registros relacionados