Efeito da hipóxia na proliferação, apoptose e expressão de genes de pluripotência de células-tronco mesenquimais da polpa de dentes decíduos humanos

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Werle, Stefanie Bressan
• Orientador(a): Casagrande, Luciano
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Células-tronco; Polpa dentária; Dentes decíduos
• Palavras-chave em Inglês: Deciduous tooth; Dental pulp; Hypoxia; Stem cells
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/210216

A capacidade de diferenciação em diversos tipos celulares e a facilidade na obtenção com o mínimo de dano invasivo ao doador tornam as células-tronco provenientes da polpa de dentes decíduos esfoliados urna promessa para a engenharia de tecidos. No entanto, a pequena quantidade de células isoladas da polpa de dentes decíduos humanos é um dos principais obstáculos para a terapia celular, em que um grande número de células é crucial. A tentativa de aprimorar o microambiente da cultura celular, para promover uma expansão que comporte a aplicabilidade clínica, é um passo importante para a pesquisa e para o futuro da engenharia tecidual. O presente estudo teve por objetivo avaliar o efeito da hipóxia (3% de oxigênio) na proliferação, apoptose e pluripotência de células-tronco mesenquimais provenientes da polpa de dentes decíduos exfoliados (SHEDs). Primeiramente, foi realizada urna revisão de literatura abordando os conceitos de hipóxia, bem como o seu efeito sobre o cultivo das células-tronco com origem em tecidos dentais. O artigo original apresentou a caracterização de SHEDs (n=5), de acordo com a Sociedade Internacional de Terapia Celular. Para avaliação da atividade metabólica, o ensaio de WST -8 foi realizado após 1, 3, 5, 7 e 14 dias de cultivo em hipóxia ou normóxia. O uso do anticorpo Ki67 foi utilizado para analisar a proliferação em citômetro de fluxo. A análise da apoptose foi mensurada com Annexin V I iodeto de propídeo após 1, 4 e 7 dias, nos grupos hipóxia e normóxia. A expressão de genes relacionados à pluripotência celular (Oct4, Sox2 e Nanog) foi mensurada através de PCR quantitativo após 24 horas e 7 dias. Para a comparação estatística entre os grupos, o teste t de Student foi aplicado. Não foram observadas diferenças entre a atividade metabólica, apoptose e proliferação das SHEDs cultivadas em normóxia ou hipóxia (p>0,05). O ensaio de WST-8 demonstrou o crescimento exponencial para todas as culturas, no período analisado. A maior fração de células em proliferação foi observado no quarto dia de análise em ambos os grupos, sendo que foi observada uma reduzida fração de células mitóticas nos dias 1 e 7. A expressão de Oct4, Sox2 e Nanog foi significantemente maior no grupo hipóxia (p<0,01). Esses achados apontam o aumento nos marcadores de pluripotência, possibilitando a maior capacidade de diferenciação celular, como a principal vantagem do cultivo das SHEDs em situação de hipóxia.