Achyrobichalcona obtida a partir de Achyrocline satureioides (lam.) DC. Asteraceae : isolamento, caracterização, complexação com ciclodextrina e avaliação da atividade antitumoral

• Ano de defesa: 2013
• Autor(a) principal: Carini, Juliana Poglia
• Orientador(a): Bassani, Valquiria Linck
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Achyirobichalcona; Achyrocline satureioides; Marcela; Asteraceae; Atividade antitumoral
• Palavras-chave em Inglês: Isolation; High speed countercurrent chromatography; High performance liquid chromatography; Validation; Anticancer; Quercetin; Luteolin; 3-O-methylquercetin
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/10183/233413

Achyrobichalcona (ACB), objeto de estudo desta tese, é um biflavonoide recentemente encontrado em Achyrocline satureioides. O objetivo inicial deste trabalho voltou-se ao isolamento da ACB a partir de um extrato hidroalcoólico de A. satureioides. Para tanto, um método semi-preparativo utilizando cromatografia em contracorrente de alta velocidade foi desenvolvido. O isolamento foi realizado em duas etapas: 1) obtenção de frações enriquecidas em ACB provenientes do fracionamento do extrato; e 2) isolamento da ACB a partir destas frações enriquecidas. A separação foi realizada utilizando-se um sistema bifásico de solventes: hexano-acetato de etila-metanol-água, nas proporções 0.8:1:0.8:1, (v/v) para a primeira etapa e 0.9:0.9:0.8:1, (v/v) para a segunda etapa. O produto resultante foi purificado, cristalizado, identificado e o seu estado sólido caracterizado. O método resultou na obtenção de ACB com bom rendimento (67%) e pureza (próximo à 90%) para uso em estudos posteriores. Um método indicativo de estabilidade por cromatografia líquida de alta eficiência foi desenvolvido com o objetivo de avaliar todos os lotes de ACB isolada. Os parâmetros cromatográficos foram otimizados com o auxílio do desenho experimental Box- Behnken, gerando o sistema cromatográfico ideal para a quantificação da ACB: 37% de acetonitrila na fase móvel (63% de água/ácido ortofosfórico 1%), fluxo da fase móvel de 1,2 mL/min e 33°C de temperatura da coluna. O estudo revelou que a resolução entre impurezas e o pico da ACB e o fator de retenção foram significativamente alterados quanto os parâmetros cromatográficos foram variados. O modelo mostrou-se adequado e com boa capacidade preditiva. O método foi validado com sucesso, sendo linear, específico, exato e preciso. A robustez foi avaliada pelo desenho Plackett-Burman, demonstrando que o comprimento de onda de detecção e fluxo da fase móvel devem ser rigorosamente controlados, pois influenciam na concentração da ACB. A ACB foi instável apenas em meio alcalino; sua reação de degradação obedeceu a uma cinética de segunda ordem. A etapa seguinte objetivou avaliar comparativamente as propriedades antitumorais apresentadas por ACB, A. satureioides e outros flavonoides presentes na planta: quercetina (QCT), luteolina (LUT) e 3-O-metilquercetina (3OMQ). Primeiramente, uma revisão sobre esse tema foi elaborada com o objetivo de compilar as principais informações descritas na literatura a respeito das atividades quimioterapêuticas demonstradas para QCT, LUT, 3OMQ e A. satureioides. Subsequentemente, desenvolveu-se um estudo experimental para avaliar as propriedades antitumorais de um extrato de A. satureioides (EXT) e de seus principais flavonoides, isoladamente ou combinados na mesma proporção encontrada no EXT, frente à A549, uma linhagem de câncer de pulmão de nãopequenas células. A citotoxicidade do complexo ACB:hidroxipropil-β-ciclodextrina também foi avaliada para a A549. Os resultados demonstraram que tanto EXT (IC50%: 49 μg/mL) quanto seus flavonoides foram muito citotóxicos para a A549 (IC50%: 3OMQ-7,3 μM>ACB-13,5 μM>LUT-14,6 μM>QCT-51,1 μM), especialmente 3OMQ e ACB, avaliadas pela primeira vez em uma linhagem de câncer de pulmão. O estudo revelou que os flavonoides foram as únicas substâncias responsáveis pela citotoxicidade do extrato. A complexação entre ACB:HPβCD resultou em um grande incremento na solubilidade aquosa da ACB e aumento na citotoxicidade frente à A549 (IC50%: 9,15 μM). Todas as amostras causaram morte celular por indução da apoptose, sendo que para algumas delas a via extrínseca foi ativada (3OMQ, ACB e EXT). Sendo assim, o estudo demonstrou que A. satureioides e seus flavonoides são promissores agentes antitumorais e que a complexação com ciclodextrinas pode representar uma estratégia tecnológica importante no intuito de melhorar as propriedades físico-químicas e biológicas de moléculas bioativas.