Construção e avaliação funcional de um plasmídeo terapêutico para expressão da Interleucina 10 (IL-10) de Mus musculus em células mamíferas, utilizando como veículo carreador linhagens de Lactococcus lactis invasivas: desenvolvimento de uma estratégia alternativa para o tratamento de doenças inflamatórias intestinais

• Ano de defesa: 2012
• Autor(a) principal: Fernanda Alvarenga Lima
• Orientador(a): Anderson Miyoshi
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Genética
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUOS-8YVMPD

As superfícies de mucosa são os principais sítios de interação entre o corpo e o meio externo constituindo uma das primeiras linhas de defesa do organismo, sendo consideradas um alvo atraente para a entrega de drogas biológicas. Por isso, nas últimas décadas o desenvolvimento de estratégias mais eficientes para entrega de plasmídeos vacinais e/outerapêuticos às mucosas tem recebido considerável atenção. Assim, o uso de bactérias carreadoras desses plasmídeos, pela rota oral, constitui uma estratégia promissora. Para tanto, a utilização de bactérias não patogênicas como as Bactérias Lácticas (BL), constitui uma opção segura para este propósito. Lactococcus lactis é a BL modelo e vem sendo muito utilizada para a produção e entrega de antígenos e citocinas ao nível de mucosas. Neste contexto, com o objetivo de otimizar a entrega de plasmídeos para células epiteliais humanas, foram construídas linhagens de L. lactis invasivas e também um plasmídeo replicativo em L. lactis, contendo um cassete de expressão eucariótica denominado pValac. Assim, a utilização da linhagem invasiva de L. lactis capaz de entregar o vetor pValac codificando a Interleucina 10 (IL-10) de Mus musculus, uma potente citocina antiinflamatória, poderia representar uma nova estratégia para o tratamento de doenças inflamatórias como as doenças inflamatórias intestinais (IBDs). Assim, este trabalho teve como objetivo construir o plasmídeo terapêutico pValac::IL-10 e verificar a sua funcionalidade, in vitro, assim como a clonagem deste plasmídeo em uma linhagem invasiva de L. lactis, visando o desenvolvimento de uma terapêutica alternativa e mais eficaz contra as IBDs. A sequência codificadora da IL-10 foi obtida a partir de um plasmídeo sintético contendo a ORF da IL-10 de M. musculus e clonada no vetor Zero Blunt® TOPO® e subclonada no vetor pValac. Para avaliação da funcionalidade do plasmídeo pValac::IL-10, células da linhagem CHO (Chinese Hamster Ovary) foram transfectadas com o plasmídeo construído e a expressão da IL-10 por essas células foi avaliada por ELISA, Western Blot, Microscopia Confocal e FACS. Por fim, o plasmídeo pValac::IL-10 foi transformado na linhagem invasiva de L. lactis e a mesma foi então utilizada em um ensaio piloto, in vivo,para avaliar a capacidade terapêutica e imunomoduladora em camundongos com IBD experimental. Enfim, este trabalho constitui um primeiro passo rumo ao desenvolvimento de uma nova estratégia para o controle de doenças inflamatórias além da validação da eficáciae efetividade da linhagem invasiva de L. lactis como veículo para novas terapias e vacinas de DNA.