Avaliação ultraestrutural e funcional do espermatozoide humano submetido ao processo de liofilização

• Ano de defesa: 2017
• Autor(a) principal: Marcelo Araujo Cabral
• Orientador(a): Selmo Geber
• Banca de defesa: Henrique Vitor Leite, Alamanda Kfoury Pereira, Maria Lecticia Firpe Penna, Renata de Lima Bossi
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais
• Palavras-chave em Português: Liofilização; Espermatozoide Humano
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/BUBD-AX8KEL

Introdução Nos últimos anos a conservação de sêmen tornou-se caro e difícil. Os bancos de esperma são fundamentais para promover em situações especiais a possibilidade de reprodução de casais com dificuldade reprodutiva. O custo é determinado pela necessidade do uso do nitrogênio liquido, área física e permanente vigilância do processo por pessoal especializado. A alternativa que se procura a esta situação é uma maneira mais pratica e de baixo custo. A liofilização é processo que se baseia na retirada de liquido de qualquer estrutura biológica ou não. È muito utilizada na indústria de medicamentos e alimentícia. A possibilidade de conservação de espermatozoide humano após liofilização é uma das formas que se pretende com objetivo de redução de custos no armazenamento desta célula reprodutiva. Objetivo Analisar o impacto da liofilização na estrutura morfológica e funcional (integridade de DNA) de espermatozoide humano submetido a criopreservação e posterior liofilização. Material e Métodos Para realizar a pesquisa foram utilizados 26 amostras de sêmen fornecidas por homens voluntários e sadios. As amostras foram avaliadas por espermograma que revelaram parâmetros normais (OMS). As amostras foram submetidas a criopreservação e posterior liofilização em diferentes meios de cultivo (FreezingMedium, SpermFreezeSolution, mHTF, Gamete e solução EDTA). Após o processo reavaliou-se os espermatozoides liofilizados e reidratados através da microscopia eletrônica de varredura (avaliação morfológica) e através de testes funcionais de integridade do DNA (Halosperm e teste da eosina Negrosina). Resultados Todas as amostras analisadas, independente do meio de cultivo utilizado, mostraram lesões morfológicas em sua ultraestrutura (cabeça, membrana celular, cauda). Os testes funcionais revelaram importantes lesões de DNA das células germinativas analisadas. Todos os espermatozoides ficaram inertes e com diagnóstico funcional de morte celular. Discussão O estudo revelou que as técnicas utilizadas para criopreservação e liofilização utilizadas são geradoras de perda das características ultra estruturais e funcionais dos espermatozoides analisados. Algumas variações técnicas de liofilização deverão ser testadas para se tentar obter resultados mais favoráveis que os alcançados no presente estudo. Conclusões Os espermatozoides humanos após serem submetidos a liofilização apresentaram alterações ultra estruturais evidentes, assim como comprometimento da sua capacidade funcional de manter integro o DNA nuclear. As alterações ultra estruturais e funcionais observadas apresentaram pequenas variações conforme o meio de cultivo nos quais foram submetidos a liofilização, indicando a necessidade de novos estudos relacionados a técnicas diferentes daquelas que estudamos, na esperança de encontrar-se melhor maneira de proteção para os espermatozoides durante o processo de liofilização.